生物素與親和素/鏈霉親和素的非共價結合是已知最強的分子相互作用之一，解離常數（Kd）在飛摩爾至低皮摩爾范圍[1]，親和力比抗原-抗體反應高10-100萬倍[2]。其極慢的解離速率和超高親和力使其成為抗體藥物研發和蛋白質研究的核心工具。然而，生物素標記蛋白制備常面臨標記不完全、批間差異大、穩定性不足等挑戰，限制了其在高精度實驗中的應用。
近岸蛋白提供160+款生物素標記蛋白和抗體，覆蓋細胞治療、抗體藥物、疫苗等熱門靶點，采用人源細胞表達，經HPLC驗證純度，ELISA/BLI檢測活性，確保高批間一致性和優異性能。我們提供Avi-Tag定點標記和化學標記兩種定制服務，滿足多樣化實驗需求，助力加速藥物開發。
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高品質產品：批間一致性高，活性經SPR/BLI、ELISA驗證，適用于蛋白質純化、抗體篩選、蛋白互作研究等。
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定制化服務：Avi-Tag與化學標記技術靈活選擇，支持個性化實驗設計。
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廣泛適用性：支持SPR、BLI、ELISA、親和層析、抗體篩選等實驗，助力基礎研究與藥物開發。
核心應用場景
1 蛋白質互作研究
生物素-鏈霉親和素系統在表面等離子共振（SPR）等技術中表現卓越。SPR芯片表面修飾鏈霉親和素，可牢固結合生物素標記的目標蛋白。分析物注入流動池后，若與目標蛋白發生特異性結合，將引發共振信號變化，精準分析親和力、結合動力學等，廣泛用于蛋白-蛋白、蛋白-小分子互作研究。
2 親和層析純化
生物素標記蛋白通過與固定在層析柱上的鏈霉親和素/親和素特異性結合，實現高效純化。該方法選擇性強，顯著減少非特異性結合，純化效率高。洗脫條件靈活，可通過pH調節、競爭性配體（如游離生物素）或溫和條件釋放目標蛋白，保護活性。
3 抗體篩選與表征
高靈敏度檢測：生物素標記增強ELISA、Western Blotting、流式細胞術等信號放大。通過生物素標記的二抗與鏈霉親和素偶聯的酶/熒光團結合，低豐度抗原也能被精確檢測。
親和力與特異性評估：生物素化抗原固定于鏈霉親和素表面，與候選抗體孵育后，通過鏈霉親和素標記的檢測系統快速篩選高親和力、高特異性抗體，優化候選分子。
Avi-Tag生物素標記
Avi-Tag是一個由15個氨基酸殘基組成的短肽標簽，通常鏈接至蛋白的N-或C-末端，對蛋白活性影響很小。Avi-Tag在體內或體外都能被生物素連接酶（BirA）在賴氨酸殘基連接上一個生物素，從而實現蛋白的生物素化。
BirA酶催化AviTag生物素化示意圖
化學標記法
化學標記法是將蛋白N-末端游離胺基及內部的賴氨酸側鏈上的胺基與生物素分子結合，通常一個蛋白質分子會被標記上多個生物素分子?；瘜W標記法具有靈敏度高、tag free等特點，是常用的生物學方法之一。
帶NHS基團的生物素可與目標分子（蛋白質）上的胺基反應
不同生物素標記蛋白優缺點
| 對比 | Avi-Tag生物素標記 | 化學標記法 |
| 是否需要tag | 是 | 否 |
| 是否定點 | 定點 | 非定點，隨機 |
| 標記均一性 | 均一 | 可能不均一，易過度生物素化 |
| 時間周期 | 與蛋白一起構建，然后表達純化等，預計4周時間 | 在有蛋白/抗體的前提下，預計1周時間 |
部分數據展示
生物活性經ELISA抗體結合驗證
Immobilized Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi) (Cat#CY18) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Anti-Human PD-1 mAb. The ED50 of Human Anti-Human PD-1 mAb is 8.83 ng/ml.
生物活性經BLI抗體親和力驗證
Loaded Anti-Human PD-1 mAb-Fc on Protein A Biosensor, can bind Biotinylated Human PD-1 (C-6His-Avi) (Cat#CY18) with an affinity constant of 1.54 nM as determined in BLI assay.
Immobilized Recombinant Human CALCRL&RAMP1 Heterodimer Protein (C-Fc) (Cat#C39Y) at 2 μg/ml (100 μl/well) can bind Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade) (Cat#NC318): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Human CGRP Antibody (Erenumab, Research Grade) (Cat#NC318) is 16.13 ng/ml.
Immobilized Human C5AR1 Antibody (Avdoralimab, Research Grade) (Cat#NC348) at 10 μg/ml (100 μl/well) can bind Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc) (Cat#C45Y): Biotinylated by NHS-biotin prior to testing. The ED50 of Recombinant Human C5AR1 N-ECD (C-Fc) (Cat#C45Y) is 2.623 ug/ml.
部分生物素化靶點
| PD-1 | HER2 | TSLP | EGFR |
| PD-L1 | Trop-2 | VEGFR | EpCAM |
| CTLA-4 | CLDN 18.2 | IgG1 Fc | CD30 |
| LAG-3 | MSLN | PCSK9 | PD-L2 |
| TIGIT | GPC3 | CXADR | FcRn |
| TIM-3 | Nectin-4 | LDL R | CD52 |
| CD47 | CD20 | DR5 | CA125 |
| B7-H3 | BCMA | CD36 | TGF-beta 3 |
| OX40 | CD79B | P-selectin | TGF-beta 1 |
| 4-1BB | CD22 | IL-3R | LRRC15 |
參考文獻
[1]Dechancie J , Houk K N .The origins of femtomolar protein-ligand binding: hydrogen-bond cooperativity and desolvation energetics in the biotin-(strept)avidin binding site.[J].Journal of the American Chemical Society, 2007, 129(17):5419.DOI:10.1021/ja066950n.
[2]Vito A D , Reitano E , Poggi L ,et al.Biotin oligonucleotide labeling reactions: A method to assess their effectiveness and reproducibility[J].Analytical Biochemistry, 593[2025-06-05].DOI:10.1016/j.ab.2020.113590.