In cell western assay(ICW) 分析是在細(xì)胞微孔板中進(jìn)行的免疫定量熒光分析(96或384孔),結(jié)合了Western Blot的特異性和ELISA的可重復(fù)性和高通量。微孔板內(nèi)的細(xì)胞經(jīng)過(guò)固定、透化、一抗、二抗孵育、洗滌等步驟后,即可進(jìn)行微孔板掃描成像,實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)蛋白的精確定量。
抗原抗體原位結(jié)合,無(wú)需抽提蛋白,無(wú)需進(jìn)行裂解細(xì)胞、制膠、電泳、轉(zhuǎn)膜等步驟,不僅節(jié)省了大量時(shí)間,而且大大提升了實(shí)驗(yàn)通量和重復(fù)性。可直接檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白水平,磷酸化水平,受體活化水平等。擁有原位雜交,通量高,高度可重復(fù)等優(yōu)點(diǎn)。遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)Western Blot,在藥物篩選,RNAi研究等方面具有非常好的。
愛(ài)思益普擁有LI-COR公司的OdysseyDLx雙色紅外熒光成像平臺(tái),該平臺(tái)具有685nm和785nm激發(fā)波長(zhǎng)的兩個(gè)獨(dú)立的紅外激光器,分別激發(fā)兩種紅外熒光染料,產(chǎn)生720nm和820nm的發(fā)射光,然后由兩個(gè)高靈敏度雪崩式光電二極管檢測(cè)器同時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)。
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本平臺(tái)除了可進(jìn)行ICW試驗(yàn),也可應(yīng)用于普通的蛋白雜交實(shí)驗(yàn)、凝膠遷移實(shí)驗(yàn)和蛋白均一化實(shí)驗(yàn)等等。與常規(guī)的檢測(cè)方式具有以下優(yōu)點(diǎn):
1)檢測(cè)準(zhǔn)確:直接檢測(cè),無(wú)需加酶底物,非酶動(dòng)力學(xué)反應(yīng),檢測(cè)的信號(hào)強(qiáng)度和結(jié)合的二抗數(shù)量具有線性關(guān)系,保證定量的準(zhǔn)確性
2)靈敏度高:PVDF膜和NC膜在可見(jiàn)光范圍內(nèi)其自發(fā)熒光較強(qiáng),使較低豐度 蛋白條帶熒光信號(hào)被掩蓋,使用近紅外時(shí)避開(kāi)了背景熒光信號(hào)的干擾, 因此靈敏度更高。
3)雙色檢測(cè),同時(shí)成像:保障相同的雜交條件,結(jié)果同時(shí)輸出,直接比對(duì),減少誤差。
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