In cell western assay(ICW) 分析是在細胞微孔板中進行的免疫定量熒光分析(96或384孔),結合了Western Blot的特異性和ELISA的可重復性和高通量。微孔板內的細胞經過固定、透化、一抗、二抗孵育、洗滌等步驟后,即可進行微孔板掃描成像,實現對細胞內目標蛋白的精確定量。
抗原抗體原位結合,無需抽提蛋白,無需進行裂解細胞、制膠、電泳、轉膜等步驟,不僅節省了大量時間,而且大大提升了實驗通量和重復性??芍苯訖z測細胞內蛋白水平,磷酸化水平,受體活化水平等。擁有原位雜交,通量高,高度可重復等優點。遠優于傳統Western Blot,在藥物篩選,RNAi研究等方面具有非常好的。
愛思益普擁有LI-COR公司的OdysseyDLx雙色紅外熒光成像平臺,該平臺具有685nm和785nm激發波長的兩個獨立的紅外激光器,分別激發兩種紅外熒光染料,產生720nm和820nm的發射光,然后由兩個高靈敏度雪崩式光電二極管檢測器同時檢測熒光信號。
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本平臺除了可進行ICW試驗,也可應用于普通的蛋白雜交實驗、凝膠遷移實驗和蛋白均一化實驗等等。與常規的檢測方式具有以下優點:
1)檢測準確:直接檢測,無需加酶底物,非酶動力學反應,檢測的信號強度和結合的二抗數量具有線性關系,保證定量的準確性
2)靈敏度高:PVDF膜和NC膜在可見光范圍內其自發熒光較強,使較低豐度 蛋白條帶熒光信號被掩蓋,使用近紅外時避開了背景熒光信號的干擾, 因此靈敏度更高。
3)雙色檢測,同時成像:保障相同的雜交條件,結果同時輸出,直接比對,減少誤差。
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