隨著分子診斷的不斷發展,引物探針全預混試劑以方便快捷的優勢成為熱門需求。然而傳統Taq酶抗體原料通常僅封閉Taq酶的聚合活性,其5'-3'外切酶活性仍然暴露,導致與探針混合后,在低溫下仍發生探針切割釋放信號,造成假陽性的問題。
為了解決上述問題,近岸蛋白特別推出雙活性封閉的Taq酶抗體(目錄號:Z088),與Taq DNA Polymerase 結合后,能夠同時高效封閉其5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性,從而抑制低溫條件下由引物的非特異性退火引起的非特異性擴增,和探針切割造成的假陽性,從而支持引物探針、酶以及Buffer等全預混qPCR/qRT-PCR體系的搭建。
產品特點
1)高特異性:與Taq 酶親和力高,有效避免非特異性擴增;
2)熱啟動迅速:95 ℃、30 s 即可啟動Taq 酶活性;
3)支持全預混:可將除模板以外的所有組分預混成一管,使用便捷高效;
4)適用范圍廣:適配野生型及多種突變型Taq酶的封閉。
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產品性能
1 雙活性封閉性能優
將帶有熒光標記的模板分別與未封閉、單封閉抗體以及雙封閉抗體的Taq酶混合,50℃實時檢測熒光值變化。結果顯示,雙封閉抗體能夠很好的封閉Taq酶的5' - 3'聚合酶活性以及5' - 3'外切酶活性。同時使用雙封閉抗體,品牌A和品牌B同類產品分別封閉Taq DNA聚合酶,檢測封閉效果。結果顯示,近岸蛋白產品的封閉效果優于品牌A和品牌B。


圖示1. 不同活性位點封閉效果測試

圖示2. 封閉效果驗證
2 酶活釋放快
使用5U/ul 雙抗體封閉Taq DNA聚合酶,95℃下熱啟動30s。結果顯示酶活釋放速度快,95℃,30 s即可釋放酶活,不影響后續擴增。

圖示3. 酶活釋放效果測試
3 適配全預混
使用單封閉抗體,雙封閉抗體分別封閉Taq DNA聚合酶,混合ASFV的引物探針制備成全預混試劑,在37℃放置7d后,分別擴增2000拷貝,200拷貝和20拷貝ASFV質粒。結果顯示,雙封閉抗體全預混的基線更平穩,擴增平臺值更優,且37℃穩定性強,與-20℃保存試劑擴增無明顯差異。

圖示4. 不同抗體封閉的全預混效果測試
4 穩定性強
使用熱加速破壞性試驗測試雙封閉抗體的穩定性。在37℃放置2d、5d、7d和14d,通過熒光法檢測發現雙封閉抗體(Z088)在14d封閉效果表現優異,穩定性更高。

圖示5. 雙封閉抗體穩定性測試
5 適用范圍廣
使用雙封閉抗體分別封閉野生型和突變型TaqDNA 聚合酶,通過熒光法檢測封閉效果。結果顯示,對于不同類型的Taq酶,近岸蛋白雙封閉抗體封閉效果表現優異。

圖示6. 雙封閉抗體適配不同類型的Taq酶
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