LAMP具有簡單的工作流程,用于DNA或RNA檢測。因其擴增速度快、操作簡單和對設備依賴性低等優點廣泛用于各類病毒、食源病原體、水質微生物等快速篩查。
LAMP反應的檢測方法有哪些?
LAMP有多種檢測選項包括電泳檢測法、肉眼觀察法以及熒光檢測法。
電泳檢測法
LAMP反應產物可以通過電泳檢測來判斷目的基因是否發生了擴增。你會發現電泳的結果顯示為彌散狀,而不像常規PCR只有1條或幾條條帶,那是因為LAMP的最終產物會有多種結構。
肉眼觀察法
肉眼觀察法由于最直觀、快速且對儀器設備需求低而被廣泛應用于LAMP技術中。根據是否需要額外加入顯色劑,將肉眼觀察法分為濁度觀察法和顯色觀察法。
濁度觀察法不需要額外加入顯色劑,是基于LAMP反應體系中DNA聚合消耗ATP所產生的大量焦磷酸鹽與體系中的鎂離子反應,生成焦磷酸鎂的白色沉淀。
如果加入一些自發光染料,你會發現隨著反應的進行,若有陽性擴增,會發生顏色的變化。比如加入羥基萘酚藍(HNB),起初與Mg2+結合顯示紫羅蘭色,隨后失去Mg2+溶液變成藍色。
顯色觀察法則需要額外加入顯色劑,反應中釋放的H?離子降低體系pH值,使pH敏感染料發生顏色變化。常見的pH指示劑有酚紅(陰性-紅色、陽性黃色)等。
熒光檢測法
若在反應體系中加入嵌合型熒光染料(SYBR Green、EvaGreen等),通過熒光定量PCR儀對LAMP反應過程進行實時監控,通過Ct值的大小可以對待測樣本中的目標基因含量進行定量分析。
若需要多重檢測或更高特異性的應用,可以使用各種基于探針的熒光方法。
對于這些檢測方法,我們該如何選擇?讓我們一起看看近岸蛋白給出的選擇指南。


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