慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD） 是全球公共健康問題[1]，全球CKD患病率高達(dá)13.4%以上，呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)[2]。腎臟纖維化（Fibrosis）是形成CKD的關(guān)鍵病理原因，作為多數(shù)慢性腎臟病的終末期表現(xiàn)，如果放任纖維化的持續(xù)發(fā)展，會(huì)造成多器官功能障礙，最終導(dǎo)致多器官衰竭而亡，目前尚無(wú)有效治療策略。為了深入研究腎臟纖維化的發(fā)病機(jī)制以及開發(fā)新的治療方法，建立可靠的腎臟纖維化疾病模型至關(guān)重要。
TGF-β1重組蛋白常用來(lái)體外誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2），從而構(gòu)建腎間質(zhì)纖維化細(xì)胞模型。近岸蛋白提供高活性，高批間一致性的人TGF-β1重組蛋白，助力您的纖維化建模實(shí)驗(yàn)。
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纖維化機(jī)制
臨床上常見肺纖維化、腎纖維化、肝纖維化、心肌纖維化等病癥，纖維化也是導(dǎo)致多種疾病發(fā)病率、死亡率升高的主要原因之一。盡管發(fā)病的病灶各不相同，其發(fā)病原因大同小異，均是由于膠原蛋白（collagen）、纖維粘連蛋白（fibronectin, FN）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-smooth muscle actin, α-SMA）等細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM）過度堆積，導(dǎo)致成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化、炎癥介質(zhì)分泌增加，最終造成不可逆的器官纖維化。
TGF-β信號(hào)通路在腎臟纖維化中的關(guān)鍵作用
TGF-β信號(hào)通路是驅(qū)動(dòng)腎臟纖維化的核心機(jī)制，其通過配體（以TGF-β1和β3為主）與Ⅱ型受體（TGFR2）結(jié)合，激活經(jīng)典Smad依賴通路：TGFR2反式磷酸化激活Ⅰ型受體（TGFR1），后者磷酸化Smad2/3并形成Smad2/3-Smad4三聚體復(fù)合物入核，直接調(diào)控靶基因表達(dá)[3]。該通路通過多靶點(diǎn)促纖維化作用導(dǎo)致病理進(jìn)展：一方面上調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）合成基因（如膠原、纖連蛋白）并抑制其降解（抑制MMPs、促進(jìn)TIMPs分泌），打破ECM代謝平衡；另一方面誘導(dǎo)腎系膜細(xì)胞增殖分化、內(nèi)皮細(xì)胞肥大凋亡，并通過上皮/內(nèi)皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT/EndoMT）激活肌成纖維細(xì)胞，同時(shí)參與表觀遺傳修飾（如Smad3-HDAC復(fù)合物介導(dǎo)的基因甲基化）。這些機(jī)制協(xié)同促進(jìn)ECM過度沉積、肌成纖維細(xì)胞積聚及組織瘢痕形成，最終引發(fā)腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化，導(dǎo)致腎功能進(jìn)行性衰竭[5][6]。
圖1 經(jīng)典TGF-β-腎臟纖維化信號(hào)通路[4]
TGF-β1體外誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞（HK-2）構(gòu)建腎間質(zhì)纖維化細(xì)胞模型方法[5]：
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細(xì)胞培養(yǎng)：
將HK-2細(xì)胞用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM/F12 (1:1) 完全培養(yǎng)基，于37℃、5% CO? 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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每隔 2-3天換新鮮培養(yǎng)基一次。
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TGF-β1處理：
HK-2細(xì)胞匯合度至80%，添加10 ng/mL TGF-β1重組蛋白（Cat.No.:CA59, 近岸蛋白），孵育48小時(shí)。
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細(xì)胞收集與鑒定：
收集細(xì)胞，進(jìn)行相關(guān)標(biāo)志物鑒定。
結(jié)果鑒定-上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (EMT) 的特征：
上皮細(xì)胞標(biāo)志物（如cytokeratins和E-cadherin）缺失。
間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物（如N-cadherin、vimentin和纖連蛋白）的表達(dá)上調(diào)。
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產(chǎn)品數(shù)據(jù)
Measured by its ability to inhibit the IL-4-dependent proliferation of TF1 human erythroleukemic cells. The ED50 for this effect is 4-40 pg/ml
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參考文獻(xiàn)
[1] 上海市腎內(nèi)科臨床質(zhì)量控制中心專家組.慢性腎臟病早期篩查、診斷及防治指南(2022年版)[J].中華腎臟病雜志,2022,38(5):453-464.
[2] GBD CHRONIC KIDNEY DISEASE COLLABORATION. Global,regional,and national burden of chronic kidney disease,1990-2017:A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017[J].Lancet,2020,395 (10225):709-733.
[3] 許艷芳,萬(wàn)建新. TGF-β1與BMP-7在腎間質(zhì)纖維化中的作用[J]. 華夏醫(yī)學(xué),2007,20(3):623-626.
[4] 楊惠元,韋妙靈,牧蘇婉,李勇.腎臟纖維化的診斷、治療與分子機(jī)制研究進(jìn)展[J].華夏醫(yī)學(xué),2024,37(5):8-15.
[5 ]黃上,周琳,劉勁松,李仲普,郭玉星,張曉白,林哲.腎復(fù)康對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞HK-2纖維化模型的影響及其機(jī)制研究[J].中藥藥理與臨床,2020,36(4):154-158.
[6] Jung, H.R., Lee, J., Hong, SP. et al. Targeting the m6A RNA methyltransferase METTL3 attenuates the development of kidney fibrosis. Exp Mol Med 56, 355–369 (2024).