慢病毒的感染具有整合特性,能夠將外源基因有效地整合到宿主染色體上,達到持久性表達,因而非常適合構建穩轉細胞株,用于基因的功能研究，然而包裝容量小、病毒滴度低也是限制它大顯身手的弊端所在，因此只適合常規基因，無法實現較大基因的穩轉株構建。AAV雖然是體內研究的理想載體，但由于載體容量等原因也無法實現較大基因在體內的長期穩定表達。因此，開發一種新的基因傳遞工具對于較大基因的體內外研究至關重要。
腺病毒包裝容量大，幾乎能感染所有類型的細胞，容易制得高滴度的病毒，而且非常適合體內外研究，因此利用腺病毒來制備穩轉株，實現基因在體內的長期穩定表達，可能是開發這一新型工具的重要突破口。然而，腺病毒感染細胞只能實現基因的瞬時表達，單從這一點考慮，恐難實現。如何才能發揮其長處，彌補其短板，是需要攻克的難點。
Gene delivery
我們知道，PiggyBac（PB）轉座子是研究基因功能,制備轉基因動物及基因治療的優良載體，具有廣泛宿主譜，通過“剪切-粘貼”機制介導外源基因的穩定整合與表達。但其目前應用的主要方式仍是通過質粒轉染，而質粒載體本身存在轉導效率低、非整合等弊端。綜合piggybac系統實現大基因穩轉和腺病毒廣泛的感染特性兩個方面的優點，我們開發了一種新的可以實現用于大基因穩轉及長時程表達的腺病毒-piggybac新系統。
腺病毒與PiggyBac（PB）強強聯合
強強聯合
腺病毒與轉座子聯手
助力體內外研究
在實際應用過程中，轉座酶和轉座子分別被構建在兩個載體上，而后導入細胞。我們發現，無論是質粒組還是腺病毒組，添加轉座酶組細胞存活數量要遠遠多于未添加組，這說明了轉座酶在轉座過程中的必需性；而腺病毒組細胞存活數量遠多于質粒組，這說明腺病毒轉座體系的效率更強。（圖A、B為質粒轉座體系，圖C、D為腺病毒轉座體系）
質粒轉座子體系 pk 腺病毒轉座子體系
一、腺病毒轉座體系較質粒轉座體系效率更高
首先，我們將PB轉座子和轉座酶分別構建至腺病毒載體并包裝腺病毒，分別通過質粒和病毒感染兩種方式處理A549細胞。發現，質粒轉染48小時，Puro加壓7天后，加轉座酶組細胞大量存活，而對照組細胞幾乎全部凋亡。腺病毒感染48小時，Puro加壓兩周后，加轉座酶組細胞穩轉擴增，對照組細胞逐漸凋亡（如下圖所示）。這說明，轉座酶在轉座子轉座過程是必需的，且腺病毒轉座子比質粒轉座子轉座效率更高。
質粒組與病毒組實驗結果
二、腺病毒-PB轉座體系效率分析
為評估腺病毒-PB轉座體系的轉座效率，我們對腺病毒組存活細胞數量進行了分析。計數與染色結果顯示，加轉座酶組的存活細胞數量是未加轉座酶組的近33倍（如下圖所示）。
腺病毒組存活細胞分析
三、腺病毒-PB轉座體系應用
腺病毒與PiggyBac轉座系統的融合，既可進行細胞的高效感染，又可實現外源基因在宿主細胞的穩定整合與表達。因此，如果您有基因的穩轉需求，無論是常規基因還是較大基因，常規細胞還是難感染的細胞，體內研究還是體外研究，都可以優先選擇腺病毒-PB轉座體系。利用這一體系可以完美地解決穩轉株構建以及外源基因在動植物體、組織中穩定表達的難題，尤其是對那些較大基因來說，這一體系尤其適用，歡迎各位老師咨詢訂購！
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