CRISPR/Cas9作為一種細菌和古細菌長期演化過程中形成的一種適應性免疫防御，其高效的整合、切割能力一經發現，便受到科研工作者的關注。2012年，Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier證明CRISPR/Cas9系統可以在體外切割雙鏈DNA；2013年，張鋒首次用CRISPR/Cas9系統在原核生物 (大腸桿菌) 中實現基因組編輯。

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CRISPR/Cas9系統的出現為人類基因編輯提供了新的可能性，隨著近年來分子生物學的快速發展，已廣泛應用于眾多領域。如：表達調控和基因功能的研究、細胞動物模型的構建、癌基因和藥物靶點的篩選，在基因治療中更是具有巨大的發展前景，為多種疾病提供了新的治療方法。

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CRISPR/Cas9技術的兩個核心元素是sgRNA和Cas9蛋白，sgRNA為根據目標位點設計的“向導”序列，Cas9蛋白會根據向導序列進行靶向編輯，二者缺一不可。針對sgRNA，能夠通過轉染質粒在細胞內表達sgRNA或者借助載體將sgRNA通過轉染的方法遞送到細胞內；而Cas9蛋白，可以通過轉染質粒在細胞內瞬時表達Cas9蛋白或者借助載體將編碼Cas9蛋白的mRNA通過轉染的方法遞送到細胞內，進而在胞內翻譯成Cas9蛋白；除此之外，還可以將Cas9蛋白通過轉染技術直接遞送到細胞內，則可省去胞內翻譯的步驟，更快的完成編輯工作。

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根據上述遞送的形式不同，目前主流的CRISPR/Cas9基因編輯技術采用的方法有以下幾種：

1. 質粒瞬轉體系：采用sgRNA表達質粒和Cas9表達質粒（或者采用sgRNA+Cas9共表達質粒）共轉染細胞進行編輯。

2. RNA瞬轉體系：體外合成sgRNA及Cas9蛋白mRNA，通過瞬時轉染技術將兩者遞送到細胞內，由細胞翻譯合成Cas9蛋白進行編輯。

3. 蛋白瞬轉體系(RNP體系)：體外將sgRNA和Cas9蛋白混合成為RNP復合效應物，再通過瞬時轉染技術（脂質體或電轉等）將復合效應物遞送到細胞內進行編輯。

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Cas9 RNP體系的優勢

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• 無外源插入基因。RNP體系避免了外源基因插入的風險，不容易引起機體的免疫反應。與mRNA相比，Cas9蛋白更加穩定，且形成的RNP復合物能夠提高sgRNA或crRNA+tracrRNA的穩定性；

• 低脫靶率。質粒轉染或病毒感染方式常導致Cas9蛋白在細胞內持續表達。RNP復合物轉導入細胞后，Cas9蛋白在72小時內即會降解，降低脫靶效應；

• 操作簡便快捷。在體外將Cas9蛋白和sgRNA或crRNA+tracrRNA混合，轉導后即可進行基因編輯。

近岸蛋白提供GMP級Cas9與科研級Cas9/Cas12a/Cas13a等Cas家族高品質蛋白產品，為基因編輯保駕護航。

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產品優勢：

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• 純蛋白體系，無外源基因引入風險。

• Cas9蛋白降解速度快，有效降低脫靶效應

• 無動物來源培養基培養

• 內毒素低，無核酸內、外切酶及RNA酶殘留

• 在蛋白兩端加了核定位信號（NLS），蛋白可進入細胞核內進行基因組編輯。

• 體外切割效率高于90%

GMP級產品通過嚴格的質檢標準，生產與質量管理符合GMP規范，保障生產過程及所有原輔料可追溯。

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GMP級產品生產標準

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數據展示：

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高純度：SDS-PAGE&SEC-HPLC雙重驗證，蛋白純度≥95%

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切割活性高：體外切割效率≥90%

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細胞編輯效率高

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將不同Cas/sgRNA RNP復合物通過電轉方式遞送至293T細胞，48h后收集細胞，抽提基因組DNA，進行體外切割測試。

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近岸蛋白基因編輯系列產品：

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*小貼士：GMP級Cas9為醫藥研發企業專用產品，表中無特別標注GMP則為科研級產品。