GMP級Laminin/Vitronectin/Fibronectin——以穩定、高效、合規加速干細胞應用-技術前沿-資訊-生物在線

GMP級Laminin/Vitronectin/Fibronectin——以穩定、高效、合規加速干細胞應用

作者:蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司 2025-04-25T00:00 (訪問量:32580)

干細胞因其自我更新能力和多向分化潛能,在再生醫學、藥物篩選和疾病建模中展現出巨大潛力,干細胞研究的每一次范式革命都始于培養體系的突破,其培養方式直接影響細胞的質量、穩定性及臨床應用前景。

圖1. 人多能干細胞 (hPSC) 培養基質的演化歷程【1】

 

干細胞傳統的黏附培養依賴于小鼠飼養層細胞,存在異源污染、操作復雜和可重復性差等局限性,為解決這些問題,以基質蛋白為基礎的無飼養層(Feeder-Free)培養體系應運而生,如層粘連蛋白(Laminin)、玻連蛋白(Vitronectin)和纖連蛋白(Fibronectin),它們可以有效模擬體內微環境,通過整合素介導的黏附作用維持干細胞的貼壁與增殖,為臨床級干細胞培養提供更安全、高效、可控的選擇。

 

層粘連蛋白(Laminin)

層粘連蛋白是一種主要存在于基底膜的細胞外基質蛋白,可以調節多能干細胞的自我更新,分化和多能性。Laminin 521(LN-521)已被證明能夠有效促進PSCs的貼附,并通過與整合素α6β1相互作用維持細胞的未分化狀態【2】。此外,LN-521支持PSCs的單細胞傳代,提高細胞存活率,并促進向特定細胞類型的分化。

 

玻連蛋白(Vitronectin)

玻連蛋白是一種細胞外糖蛋白,可與整合素αvβ5和αvβ1相互作用,促進PSCs的貼附和生長【3】。研究表明,Vitronectin能夠替代基質膠(Matrigel),能在不影響 hPSCs 分化潛力的情況下促進其增殖超過 20 次,提供更穩定的培養環境,并減少異源成分的干擾【4】。

 

纖連蛋白(Fibronectin)

纖連蛋白是廣泛分布的一種大分子量細胞外糖蛋白,作為干細胞培養基質時,可以促進細胞生長,提高細胞貼壁率,促進干細胞的自我更新。Fibronectin 和laminin 可在特定的培養體系中促進多能干細胞和間充質干細胞向心肌細胞、胰島細胞等分化【5,6】,而在PSCs培養中,Fibronectin可以提高細胞存活率,并增強細胞的增殖能力【7】。

 

重組基質蛋白培養優勢

細胞形態均一

在重組基質蛋白(如Laminin-521或Vitronectin)支持下,干細胞可形成均一、致密的克隆結構,表現出良好的細胞間連接性【8】。

 

維持多能性

基質蛋白培養方式下的PSCs可高表達OCT4、SOX2和NANOG等關鍵標志物,維持其未分化狀態【9】。

 

高增殖能力

在基質蛋白Laminin-521支持下的細胞增殖水平可與飼養層相媲美,甚至更高【10】

 

基因表達穩定

在基質蛋白培養條件下,PSCs的基因表達穩定且接近體內干細胞狀態,且應激相關基因表達水平較低【11】。

以重組基質蛋白(如Laminin-521、Vitronectin等)為基礎的干細胞培養系統,在確保細胞形態一致性、保持多能性標志物表達、提高擴增效率及基因表達穩定性方面展現出明顯優勢,并且帶來可重復性高、無異源污染風險的安全培養體驗。

 

重組基質蛋白

近岸蛋白提供一系列經驗證的重組基質蛋白,滿足不同的干細胞培養需求!

產品特點

??高純度、高活性、低內毒素

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??高批間一致性,確保實驗可重復性

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產品驗證數據

高活性重組Vitronectin(GMP)

Measured by its ability to support iPS cell attachment and spreading when used as a substratum for cell culture. The ED50 for this effect is 0.12ug/mL.

 

高活性重組Laminin521 (GMP)

Measured by its ability to support iPS cell attachment and spreading when used as a substratum for cell culture. The ED50 for this effect is 89 ng/mL.

 

高活性重組Fibronectin(GMP)

Measured by its ability to support Jurkat cell attachment and spreading when used as a substratum for cell culture.

 

支持干細胞穩定傳代培養

iPSC分別在Vitronectin、Laminin511和Laminin521的支持培養下,進行穩定連續傳代培養P1至P5,均可維持良好的生長,細胞形態均一正常。

 

有效維持細胞干性

Vitronectin、Laminin511和Laminin521培養的iPSC可以有效維持干性相關轉錄因子的表達。

 

產品推薦

Cat.NO. Product Name
C28D Recombinant Human Laminin521 E8 Protein
GMP-C28D Recombinant Human Laminin521 E8 Protein, GMP Grade
C28C Recombinant Human Laminin511 E8 Protein
C395 Recombinant Human Vitronectin
GMP-C395 Recombinant Human Vitronectin, GMP Grade
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GMP-CH38 NovoNectin®  GMP Grade (Fibronectin)

 

參考文獻

【1】Villa-Diaz, L. G., Ross, A. M., Lahann, J., & Krebsbach, P. H. (2013). Concise review: the evolution of human pluripotent stem cell culture: from feeder cells to synthetic coatings. Stem cells, 31(1), 1-7.

【2】Rodin, S., Domogatskaya, A., Ström, S., Hansson, E. M., Chien, K. R., Inzunza, J., Hovatta, O., & Tryggvason, K. (2010). Long-term self-renewal of human pluripotent stem cells on human recombinant laminin-511. Nature biotechnology, 28(6), 611–615.

【3】Braam, S. R., Zeinstra, L., Litjens, S., Ward-van Oostwaard, D., van den Brink, S., van Laake, L., Lebrin, F., Kats, P., Hochstenbach, R., Passier, R., Sonnenberg, A., & Mummery, C. L. (2008). Recombinant vitronectin is a functionally defined substrate that supports human embryonic stem cell self-renewal via alphavbeta5 integrin. Stem cells (Dayton, Ohio), 26(9), 2257–2265. 

【4】Yap, L. Y., Li, J., Phang, I. Y., Ong, L. T., Ow, J. Z., Goh, J. C., Nurcombe, V., Hobley, J., Choo, A. B., Oh, S. K., Cool, S. M., & Birch, W. R. (2011). Defining a threshold surface density of vitronectin for the stable expansion of human embryonic stem cells. Tissue engineering. Part C, Methods, 17(2), 193–207. 

【5】Zhang J, Gregorich Z R, Tao R, et al. Cardiac differentiation of human pluripotent stem cells using defined extracellular matrix proteins reveals essential role of fibronectin[J]. Elife, 2022, 11.

【6】Lin H Y, Tsai C C, Chen L L, et al. Fibronectin and laminin promote differentiation of human mesenchymal stem cells into insulin producing cells through activating Akt and ERK[J]. J Biomed Sci, 2010, 17(1): 56.

【7】Leiss, M., Beckmann, K., Girós, A., Costell, M., & Fässler, R. (2008). The role of integrin binding sites in fibronectin matrix assembly in vivo. Current opinion in cell biology, 20(5), 502–507. 

【8】Liu, B., Chen, S., Xu, Y., Lyu, Y., Wang, J., Du, Y., Sun, Y., Liu, H., Zhou, H., Lai, W., Xue, A., Yin, M., Li, C., Bai, Y., Xu, J., & Deng, H. (2021). Chemically defined and xeno-free culture condition for human extended pluripotent stem cells. Nature communications, 12(1), 3017. 

【9】Nakagawa, M., Taniguchi, Y., Senda, S., Takizawa, N., Ichisaka, T., Asano, K., Morizane, A., Doi, D., Takahashi, J., Nishizawa, M., Yoshida, Y., Toyoda, T., Osafune, K., Sekiguchi, K., & Yamanaka, S. (2014). A novel efficient feeder-free culture system for the derivation of human induced pluripotent stem cells. Scientific reports, 4, 3594. 

【10】Rodin, S., Antonsson, L., Niaudet, C., Simonson, O. E., Salmela, E., Hansson, E. M., Domogatskaya, A., Xiao, Z., Damdimopoulou, P., Sheikhi, M., Inzunza, J., Nilsson, A. S., Baker, D., Kuiper, R., Sun, Y., Blennow, E., Nordenskjöld, M., Grinnemo, K. H., Kere, J., Betsholtz, C., … Tryggvason, K. (2014). Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment. Nature communications, 5, 3195. 

【11】Stavish, D., Price, C. J., Gelezauskaite, G., Alsehli, H., Leonhard, K. A., Taapken, S. M., McIntire, E. M., Laing, O., James, B. M., Riley, J. J., Zerbib, J., Baker, D., Harding, A. L., Jestice, L. H., Eleveld, T. F., Gillis, A. J. M., Hillenius, S., Looijenga, L. H. J., Gokhale, P. J., Ben-David, U., … Barbaric, I. (2024). Feeder-free culture of human pluripotent stem cells drives MDM4-mediated gain of chromosome 1q. Stem cell reports, 19(8), 1217–1232. 

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