無動物源性NotI/HindIII限制性內切酶,讓質粒線性化更高效-技術前沿-資訊-生物在線

無動物源性NotI/HindIII限制性內切酶,讓質粒線性化更高效

作者:蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司 2025-02-17T00:00 (訪問量:29001)

限制性內切酶在特定識別位點切割DNA的特性,使得這些酶在分子生物學技術中成為必不可少的核心工具。其可在分子克隆、mRNA轉錄模板制備、基因定位和分離等等應用領域發揮重要作用。近年來,以病毒包裝為基礎的基因治療技術以及mRNA技術,逐漸在新型療法中凸顯出來。其中病毒包裝中的質粒構建和mRNA轉錄中的模板制備均需要無動物源性限制性內切酶的引入使用。

 

繼BspQI、BsaI、XbaI及PmeI后,近岸蛋白再添無動物源性NotI及HindIII限制性內切酶。

 

識別位點 

 

產品特點 
高效切割含特異性位點質粒底物

M:DNA Marker     1/3:陰性     2:品牌A     4:Novoprotein

50μl反應體系中,10U不同品牌NotI與1µg質粒進行酶切,37℃孵育1h,質粒被完全線性化。

 

M:DNA Marker     2:品牌A     4:Novoprotein

50μl反應體系中,10U不同品牌HindIII與1µg質粒進行酶切,37℃孵育1h,質粒被完全切割。

 

無非特異性核酸內切酶活性

M:DNA Marker     1:陰性     2:品牌A     3:Novoprotein

50μl反應體系中,100U過量不同品牌NotI與1µg無NotI酶切位點的質?;旌?,37℃孵育3h,Novoprotein NotI無明顯非特異性內切酶活性,而品牌A產生了明顯的非特異性切割。

 

M:DNA Marker     1:陰性     2/3:品牌A(添加量20U/100U)     4/5:Novoprotein(添加量20U/100U)

50μl反應體系中,分別用20U和100U過量不同品牌HindIII與1µg無HindIII酶切位點的質?;旌?,37℃孵育3h,無明顯非特異性內切酶活性。

 

無非特異性核酸外切酶活性

M:DNA Marker     1:陰性     2:品牌A(添加量20U)     3/4:Novoprotein(添加量20U/100U)

50μl反應體系中,分別用20U和100U過量不同品牌NotI與1µg λ HindIII DNA混合,37℃過夜孵育,無明顯非特異性外切酶活性。

 

M:DNA Marker     1:陰性     2:品牌A(添加量20U)     3/4/5:Novoprotein(添加量10U/20U/100U)

50μl反應體系中,分別用10U、20U和100U不同品牌HindIII與1µg λ HindIII DNA混合,37℃過夜孵育,無明顯非特異性外切酶活性。

 

更多主流限制性內切酶還有酶切后形成5’末端突出結構或平末端結構的XbaI酶和PmeI。以及IIS型限制性內切酶BspQI、BsaI,其酶切位點在識別位點以外,酶切后可將mRNA的Poly A結構直接暴露在3’端而不產生冗余的酶切位點殘基,從根本上杜絕多余堿基造成的不確定性。

 

近岸蛋白在推動生物藥研發生產過程中不斷探索創新,GMP級限制性內切酶BsaI、BspQI和XbaI,無動物源性PmeI、NotI及HindIII,為客戶提供更多的酶切位點選擇。

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