細胞株開發是抗體藥物CMC的起點和基礎，細胞株的好壞直接決定生產成本、工藝復雜度和產品質量。一個好的細胞株有多方面要求：

1.產量高：可降低固定投資和單次生產成本。

2.產品質量符合要求：產品質量影響藥效和安全性，而這兩項是IND和NDA的關鍵。

3.穩定性高：產量和質量在生產傳代過程中不應有大的改變。

4.可放大性：細胞株需要適合大規模生產放大。

5.合規性：保證單克隆源性以及實驗記錄完整性。細胞株的構建過程應避免接觸或使用動物來源成份或其它可能影響安全性的成份。

開發穩定細胞株的過程包括：宿主細胞的選擇，表達載體的構建與轉染，單克隆化以及高表達細胞株的篩選。目前大部分的抗體藥物都是選用的CHO細胞，但最原始的CHO細胞系流轉到不同的實驗室和公司，經過不同的培養、馴化、改造和重新克隆后形成了不同種類的CHO細胞系。這些不同CHO細胞系之間的形態、生長、表達、代謝，甚至基因組都有較大差異。如Chasin實驗室通過化學誘變和伽馬射線誘變篩選出了雙等位DHFR基因敲除的CHO宿主細胞，命名為CHO-DG44，由于完全缺失了DHFR基因的活性，并且可以無血清懸浮培養，使得篩選和加壓過程變得更加有效。還有在歐洲應用比較多的Selexis公司的SURE CHO-M細胞株，其源于ECACC CHO-K1細胞系，并經馴化后獲得，Selexis表達平臺同時運用MARs元件來提升篩選效率和目標蛋白表達量。所以，宿主細胞的選擇除了考慮研發周期、成本以及后期整體的生產成本，還需要有清晰的歷史背景信息。

表達載體的構建和轉染開始是指將表達抗體的目的基因構建到載體上，再將該載體轉染進入宿主細胞內。常用于哺乳動物細胞轉染的方法有磷酸鈣法、陽離子脂質體法、病毒轉染法和電穿孔法。沒有一種方法適用于所有的細胞和實驗，需要根據細胞類型和實驗進行選擇。理想的方法應具有高轉染效率、低細胞毒性和對正常生理學的影響最小，并且易于使用和具有可重復性等特點，所以在正式開展轉染實驗前還要做多項預試驗，優化轉染條件。

篩選高表達單克隆細胞株是細胞株構建的關鍵步驟，衡量標準包括抗體表達量、產品的純度、翻譯后修飾、代謝穩定性等。常用的篩選克隆的方法包括：有限稀釋法、流式細胞儀分選法、半固體培養基篩選法等。

由此可見，細胞株的開發涉及一系列復雜的流程，優化這流程，除了采取不同的優化策略，還需要先進設備的加持。 丹納赫生命科學聯合生物制品圈邀請了多位行業專家，將于3月29日晚講解如何高效進行細胞株的開發，近岸蛋白應用研究院資深科學家李經理受邀參加本次研討會，分享“穩定細胞株構建和篩選的關鍵環節” ，歡迎參加和共同交流！

會議時間

2022年3月29日 （周二） 19:30-21:00

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主講人簡介

報告題目：CHO宿主細胞株的開發及優化

劉大有 博士
創勝集團執行總監

二十年國際與國內制藥公司工程細胞株開發經驗，現任職于創勝集團擔任執行總監。2002-2015年任職于安進（Amgen)期間，曾負責和領導工程細胞株開發與鑒定和分子可開發性評估工作以及新技術開發，包括多個已上市產品的細胞株開發鑒定和申報。2015-2016年任職于默沙東（MSD)期間負責建立全新工程細胞株開發平臺，是該業界高效快速細胞株開發平臺的主要設計者。

報告題目： 穩定細胞株構建和篩選的關鍵環節

李德彬

近岸蛋白研發經理

近岸蛋白應用研究院資深科學家，擁有十余年抗體藥發現和評估研究經驗，近十年穩定細胞株開發經驗，搭建了CHO穩轉細胞株平臺、抗體體外功能評價平臺和報告基因型檢測細胞株平臺等抗體藥研發關鍵平臺。參與了多個全長抗體、雙特異抗體、重組蛋白和重組亞單位疫苗等類項目的細胞株構建和開發，參與PD1和CD73等十余種靶點抗體的研發和評價。

報告題目： 自動化時代下工程細胞株的開發方案

姚南 博士

丹納赫生命科學市場拓展經理

畢業于北京協和醫學院，醫學遺傳學博士，于EMBO J、Microbes infect. 等雜志上發表數篇文章。現任丹納赫生命科學市場拓展經理，曾就職于貝克曼庫爾特生命科學，任自動化及基因組學產品經理。擁有7年自動化產品及整合系統經驗，已為國內單位設計并成功搭建多套生物制藥，二代測序及合成生物學自動化系統。

蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司，是一家專注于重組蛋白應用解決方案的高新技術企業，主營業務為靶點及細胞因子類蛋白、重組抗體、酶及試劑的研發、生產和銷售，并提供相關技術服務。公司定位為醫療健康與生命科學領域原料與技術解決方案的上游供應商，致力于為下游客戶提供及時、穩定、優質的產品及服務，助力全球生物醫藥企業和研究機構的技術與產品創新升級。

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