自2023年11月，第一款自復制RNA（self-amplifying RNA, saRNA）疫苗在日本獲批上市以來，以saRNA技術路線為基礎的傳染病疫苗或腫瘤治療性疫苗已有多個項目開啟了臨床之路。saRNA模擬病毒復制模式，進入細胞后進行自我復制，從而在較低注射劑量的情況下，實現抗原的高表達，進而產生較強的免疫反應。
saRNA結構與復制原理
An Update on Self-Amplifying mRNA Vaccine Development. Vaccines (Basel). 2021
saRNA正鏈RNA分子，進入細胞后，翻譯組裝形成RNA復制酶復合物(Rep)。一方面，Rep利用saRNA合成saRNA負鏈，再以負鏈為模板合成新的saRNA拷貝，實現saRNA的自擴增。同時，Rep合成大量目的基因RNA，目的基因RNA翻譯出大量蛋白分子。
saRNA合成全流程解決方案
01 模板制備
在該環節中，高質量的質粒制備尤為重要，關系到后續體外轉錄產物的質量。環狀質粒由于無有效的終止，會轉錄出不同長度的RNA產物。為了得到特定長度的RNA，質粒必須完全線性化，線性化的質粒需確保雙鏈為平末端或5’端為突出結構。近岸蛋白提供GMP級限制性內切酶BsaI（目錄號：GMP-RE026/GMP-RE036）、BspQI（目錄號：GMP-RE057）、XbaI（目錄號：GMP-RE015）以及無動物源性PmeI（目錄號：RE106），高效實現質粒線性化。
02 體外轉錄
T7 RNA Polymerase是體外轉錄生產治療用mRNA的關鍵酶。saRNA因添加了復制酶序列，導致其長度過長，通常會大于8Knt長度，因此其轉錄難度增大，很難保證較好的完整性。同時因為序列長，dsRNA副產物也成為saRNA工藝的巨大難題。此時，一款可以顯著降低dsRNA雜質，并且其他性能兼具的T7 RNA聚合酶成為關鍵點。近岸蛋白經分子進化改造獲得的T7 RNA聚合酶突變體（目錄號：GMP-E122）可顯著降低轉錄產物中dsRNA雜質。
產品特點：
·顯著降低dsRNA含量——增效
·帽結構添加量可低至1mM——降本
·全能型選手
·兼容saRNA長片段模板
10Knt saRNA片段采用不同添加量無機焦磷酸酶轉錄結果。
03 DNA模板去除
IVT反應結束后，需要使用 DNase I去除 DNA 模板，以減少對后續反應的影響。近岸蛋白GMP級DNase I（目錄號：GMP-E127）可有效消化雙鏈DNA模板，而對RNA無影響。
DNase I 去除RNA樣本中的DNA殘留
04 報告基因saRNA
eGFP saRNA（目錄號：MR301）轉染不同細胞24h后成功表達。
Luciferase saRNA（目錄號：MR302）轉染不同細胞后成功表達。隨著時間延長，表達強度高于mRNA。
05 RNA藥物開發全流程解決方案
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