猴痘病毒的傳播途徑主要包括直接接觸感染動物的病變滲出物、血液、其它體液,或被感染動物咬傷、抓傷而感染。人與人之間主要通過密切接觸傳播,但也可以通過飛沫傳播,以及接觸被病毒污染的物品等方式進行傳播。近期有報道指出,猴痘出現了新的變異毒株,這種Ib型變異病毒可以通過分泌物(如呼吸道飛沫)、皮疹或受污染物品等方式進行傳播,且青少年兒童是易感人群,需要高度警惕。
近岸蛋白提供猴痘病毒A5L、A29L、A30L、A35R、B6R、E8L、H3L、M1R重組抗原、抗體、酶和試劑解決方案,用于疾病診斷和疫苗藥物研發。
一、猴痘病毒抗原抗體和試劑解決方案
部分抗體性能展示
驗證方法:乳膠法
抗體配對:DA131包被,DA130標記
驗證結果:近岸MPXV A29L抗體對檢測A29L抗原(Cat#DRA207)的靈敏度可達100pg/mL。

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二、猴痘病毒核酸檢測原料酶及預混液
猴痘是一種由猴痘病毒引起的病毒性人畜共患病,其病原體猴痘病毒是一種有包膜的雙鏈DNA病毒。該病的癥狀類似于天花,包括發熱、頭痛、肌肉疼痛、淋巴結腫大和皮疹。猴痘病毒的檢測可通過病毒分離培養技術,也可通過電子顯微鏡觀察、痘病毒抗原的免疫組織化學染色、抗正痘病毒IgM和IgG的血清研究進行檢測。然而,基于病毒流行病學特點和監測需求,猴痘病毒感染的確診更適合通過PCR方法特異性地快速檢測猴痘病毒DNA。診斷標本直接取自皮疹——皮膚、液體或痂皮等??稍诙虝r間內對痘病毒做出快速、特異性的早期篩查診斷。近岸蛋白針對DNA病原檢測提供高性能檢測預混液及全套原料酶,并且系列可凍干原料酶、預混液、凍干工藝,支持凍干型核酸檢測試劑盒快速開發。

產品性能
快速直擴型qPCR預混液(Cat# E279) NovoStart® Blood Direct Fast Probe qPCR SuperMix (UDG)
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快速:能夠支持快速程序,即在30min內完成反應;
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直擴:本品具有很強的抑制物耐受性,可用于抗凝全血、血漿、血清、尿液、咽拭子、唾液等樣品的DNA直接擴增檢測;
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方便:PCR反應所必需試劑集于一管之中,數分鐘即可完成反應體系配制;
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防污染:dUTP-UDG系統有效防止PCR產物污染造成的假陽性。


三、猴痘病毒RNA疫苗研發產品及服務
RNA技術,憑借其體外快速合成、針對靶點的高度靈活性設計以及不干擾細胞基因組的獨特優勢,已廣泛應用于預防性疫苗和治療性疫苗開發中,顯著縮短了從研發到應用的周期。近岸蛋白擁有成熟的RNA疫苗設計與開發平臺,可提供從猴痘抗原篩選、RNA序列設計、模板質粒制備、RNA原液生產、LNP包封到免疫原性評價的全流程服務。
近岸蛋白猴痘RNA疫苗開發相關案例
1 體外候選分子表征
猴痘病毒抗原有兩種主要病毒形態:包膜病毒(EV)和成熟病毒(MV)。M1、B6、A35蛋白在病毒的組裝和感染等過程起著非常重要的作用。其中A35R蛋白在病毒的結構和功能中具有一定作用,B6R蛋白參與病毒的免疫調節和感染過程,M1蛋白參與病毒粒子的組裝。近岸蛋白以猴痘病毒(MPXV)的A35R、B6R、M1R為靶標,通過不同的截短體和連接方式來開發mRNA疫苗。各候選分子在體外均獲得良好表達。

Fig. 1 mRNA design and protein expression in transfected 293T cells.
(A) mRNA design. MPXV A35R, B6R and M1R sequences were codon-optimized and inserted into the region between 5’UTR and 3’UTR. m:different truncations or fusions ; &: multivalent mixed samples.
(B-D) protein expression measured by western blotting. The four mRNAs (1-4) were mixed separately, then was mass-equally transfected into 293T cells . Cell lysates were loaded into SDS-PAGE gels for western blot analysis after 24 hours of transfection. B: anti-A35R antibody incubation; C: anti-B6R antibody incubation; D: anti-M1R antibody incubation. M: protein marker; group number; m: mRNA; L: LNP
2 動物實驗結果展示
利用ELISA檢測小鼠血清對MPXV抗原(A35R、B6R和M1R)的結合抗體反應。結果表明,在所有接種小鼠血清中均檢測到針對所有三種靶抗原的抗體,且抗體滴度隨著免疫次數的增加而顯著增加,不同組別抗體水平相當。初步評估結果表明近岸蛋白所構建的多組別分子有潛力開發成為新一代猴痘mRNA疫苗。

Fig. 2 Humoral Immune Response in mRNA-LNP (1-4)Vaccinated Mice.
(A) Schematic diagram of immunization, sample collection.Female BALB/c mice were intramuscular immunized with 10 μg mRNA-LNP vaccine on day 0 and day 14 (n = 4). Mice vaccinated with buffer were used as negative control. Serum was collected 0 day(before the initial vaccination), 14 and 28 days after the initial vaccination.
(B-D) The MPXV-specific antigen A35R, B6R and M1R IgG antibody titer was determined by ELISA. ("*" indicates comparison with the control Buffer of the same time period, and the horizontal line indicates pairwise comparisons. *p < 0.05; **p < 0.01)
近岸蛋白已儲備性開發多類型疫苗創新型候選分子,重點布局RNA疫苗、重組亞單位、類病毒粒子(VLP),致力于為下游疫苗企業客戶加快疫苗開發速度、快速進入申報階段。


綜上,近岸蛋白提供猴痘病毒優質重組抗原、抗體、酶及試劑等產品和疫苗研發全流程解決方案,用于疾病診斷和疫苗藥物研發,歡迎申請試用。電話:400-600-0940。
