8月9日，CDE官網顯示，復宏漢霖的HLX60臨床試驗申請獲受理，用于治療實體瘤。這是國內率先申報臨床的GARP單抗。
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GARP結構
GARP是一個72 kDa的I型跨膜蛋白，由662個氨基酸組成。其結構由三個區域組成：細胞外結構域，富含亮氨酸重復區域，約占蛋白的70%；疏水跨膜結構域；細胞質尾部有15個氨基酸殘基。GARP的胞外部分包含20個LRR基序，由富含脯氨酸的區域和C端LRR分成兩部分。兩個半胱氨酸（位置分別為192和331，第7和第12 LRR）負責在GARP和LTGF-β中的LAP之間形成兩個二硫鍵[1-2]。
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圖1.GARP與LTGF-β1和MHG-8 Fab形成的復合物 (PDB: 6GFF)。LTGF-β1包含兩個LAP（LAPA和LAPB）和兩個mTGF-β1分子（mTGF-β1A 和 mTGF-β1B）[1-2]。
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GARP促進TGF-β的激活
（A）Latent TGF-β (LTGF-β)。TGF-β以同源二聚體前體的形式合成，在高爾基體中被furin切割成LAP和成熟的TGF-β，它們以非共價結合，形成Latent TGF-β (LTGF-β，也稱為小潛伏復合物)。這個復合物可以與LTGF-β結合蛋白(LTBP)結合成大潛伏復合物(LLC)， LLC又與細胞外基質(ECM)結合，或GARP，使其能夠在膜上表達。GARP需要ER伴侶Gp96才能折疊和表面表達。GARP引導小潛伏復合物(SLC)通過整合素αVβ8或αVβ6結合和釋放。
（B）通過蛋白酶獨立的方式激活TGF-β。在Gp96的幫助下，SLC-GARP復合物在細胞膜上表達后，整合素通過LAP上的RGD基序與LTGF-β結合。細胞收縮或機械張力引起表面LAP的變形，介導TGF-β成熟形式的釋放。
（C）通過蛋白酶依賴的方式激活TGF-β。在Gp96的幫助下，SLC-GARP復合物在細胞膜上表達后，整合素通過自分泌或旁分泌途徑招募金屬蛋白酶(如MMP-14)或絲氨酸蛋白酶，它們切割LAP，從而釋放TGF-β[1]。
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圖2. 生物活性TGF-β釋放的多步驟過程[1]
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GARP 作為癌癥的治療靶點
GARP是LTGF-β的對接受體，促進LTGF-β的激活。在癌癥中，許多預后不良的癌癥中都出現了GARP表達的增加，無論是在腫瘤細胞中還是在TME細胞中，它都發揮著重要的作用，產生活性TGF-β，從而參與免疫抑制環境[1]。GARP 相比FoxP3的優勢在于其表達于膜上適合使用治療性抗體[3]。就其表達及其通過TGF-β激活的功能而言，GARP作為腫瘤靶標潛力巨大。
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靶向GARP治療策略
通過Treg增強GARP介導的抑制作用為治療自身免疫性疾病和移植排斥提供了一種有希望的策略。
（1）方法1利用針對miRNA的抑制劑，靶向GARP mRNA。這樣可以防止GARP mRNA的降解，從而增加GARP的表面表達，增強Treg的抑制能力。
（2）方法2應用sGARP誘導Treg。
（3）方法3將sGARP與LTGF-β聯合利用它們的免疫抑制作用，并以整合素控制的方式促進TGF-β的激活。為了產生有效的抗腫瘤免疫反應，需要抑制Treg介導的抑制。
（4-5）方法4和5代表了兩種不同的單克隆抗體(mAb)治療策略，目前處于1期臨床試驗。方法4使用一種與GARP/TGF-β1復合物結合的IgG4抗體(ABBV-151)，阻止成熟TGF-β1的釋放。導致了TGF-β1信號的抑制，隨后Treg抑制能力的降低，以及T效應細胞(Teff)功能的恢復。方法5采用一種巖藻糖基化IgG1抗體(DS-1055a)，通過抗體依賴的細胞毒性有效地消耗GARP+ Treg，防止Treg介導的抑制并恢復Teff功能[3]。
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圖3. 靶向GARP治療策略
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目前，全球僅有3款GARP單抗進入臨床階段，分別是HLX60、ARGX-115和DS-1055a。
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近岸蛋白自主研發GARP、Latent TGF-beta 1&GARP Complex、Integrin以及TGF-β相關產品二十余種，可滿足靶向GARP和TGF-β藥物研發、功能評估和質量控制等不同環節的需求。
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相關產品
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Cat. No. |
Product Name |
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Recombinant Human GARP/LRRC32 (C-Fc) |
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Recombinant Human Latent TGF-beta 1&GARP Complex Protein (N-6His, C-3*Strep) |
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Recombinant Human Integrin alpha V beta 8 Heterodimer (C-6His) |
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Recombinant Human TGF-beta 1 |
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Biotinylated Human TGF-beta 1 (N-Avi) |
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Recombinant Mouse/Rat TGF-beta 1 |
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Recombinant Human TGF-beta 2 |
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Biotinylated Human TGF-beta 2 (N-Avi) |
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Recombinant Mouse/Rat TGF-beta 2 |
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Recombinant Human/Mouse/Rat TGF-beta 3 |
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Biotinylated Human TGF-beta 3 (N-Avi) |
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Recombinant Human LAP (TGF-beta 1) |
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Biotinylated Human LAP (TGF-beta 1) (N-6His-Avi) |
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Recombinant Human Latent TGF-beta 1 (N-6His) |
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Recombinant Mouse Latent TGF-beta 1 (N-8His) |
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Biotinylated Mouse Latent TGF-beta 1 (N-8His-Avi) |
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Recombinant Cynomolgus Latent TGF-beta 1 (N-6His) |
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Biotinylated Human Latent TGF-beta 2 (N-8His-Avi) |
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Biotinylated Human Latent TGF-beta 3 (N-8His-Avi) |
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Recombinant Human TGFBR1(C-Fc) |
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Recombinant Mouse TGFBR1 (C-Fc) |
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Recombinant Human TGFBR2 (C-Fc) |
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Recombinant Mouse TGFBR2 (C-6His) |
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Recombinant Mouse TGFBR2 (C-Fc,Ile24-Asp184) |
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Recombinant Mouse TGFBR2 (C-Fc,Ile24-Asp159) |
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Recombinant Mouse TGFBR3 (C-6His) |
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293-TGFβ Res 細胞株(DMEM) |
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參考文獻
1. Bouchard, Alexanne et al. “GARP: A Key Target to Evaluate Tumor Immunosuppressive Microenvironment.” Biology vol. 10,9 836. 27 Aug. 2021, doi:10.3390/biology10090836
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2. Liénart, Stéphanie et al. “Structural basis of latent TGF-β1 presentation and activation by GARP on human regulatory T cells.” Science (New York, N.Y.) vol. 362,6417 (2018): 952-956. doi:10.1126/science.aau2909
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3. Zimmer, Niklas et al. “GARP as a Therapeutic Target for the Modulation of Regulatory T Cells in Cancer and Autoimmunity.” Frontiers in immunology vol. 13 928450. 8 Jul. 2022, doi:10.3389/fimmu.2022.928450
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