李壯林博士——榮昌生物副總裁、總工程師
Q：ADC偶聯環節以及后續純化步驟傾向于使用一次性的設備還是不銹鋼設備，選擇的時候主要考量哪些因素？
Q：小分子（如VCMMAE）滅活的方法？
A：滅活的工藝可能有很多種，需要自己去開發。
Q：ADC的中試放大（公斤級別）偶聯和純化是在化學實驗室還是在生物實驗室進行？偶聯需要隔離器嗎？
Q：DAR值的檢測是用一個方法還是多個方法互相驗證？最推薦哪種檢測方法？
A：DAR值的確定要結合小分子的特點。檢測前期可以通過質譜來定性和分析，后續的日常檢測可以利用疏水HPLC來測定DAR值。因為偶聯不同的小分子，不同的小分子疏水性不一樣，因此出峰時間不同，根據積峰面積的積分比例來計算DAR值。
Q：如何檢測抗體和小分子偶聯有效性？如何去除裸抗及未偶聯小分子？
A：有效性可以用HPLC測定DAR值確定。在做疏水HPLC分析時，未偶聯抗體會先出峰，隨著偶聯小分子的增加，出峰時間會越來越晚，從而可以鑒定出未偶聯的比例；因為小分子分子量和抗體及ADC差異比較大，小分子用超濾透析去除。裸抗的去除可以用柱層析，具體的層析柱可以根據產品特點來選擇。
A：主要看偶聯方式，偶聯體系中的pH、溫度影響比較大，緩沖體系中有機溶劑的濃度比較重要，會影響小分子及偶聯的溶解性；鹽的濃度可能會對溶解性有影響，如果鹽濃度過高，小分子和ADC的溶解性可能會差一些；對偶聯反應的影響不大。
張智濤博士——ACROBiosystems高級產品開發經理
Q：DAR值檢測方法？如何保證每批藥物的DAR值一致？
A：DAR值采用質譜和HPLC檢測，目前也有用payload抗體進行檢測的，嘗試做一些定量分析；DAR值是均值，一般認為只要在一個范圍內即可，以此來判斷均一性和穩定性。
Q：ADC藥物抗體部分早期開發免疫篩選階段的關鍵點有哪些？
A：這也是我們比較關注的一個點。在早期免疫階段首先會關注免疫抗原天然構象，天然構象決定了免疫拿到的抗體是不是能夠跟抗原進行有效的識別；其次包括抗原抗體親和力和特異性選擇；還要關注拿到抗體后的半衰期的情況，ADCC效應及與FcR的結合等。這其實跟我們常規抗體藥物的開發關注點類似。
A：雜交瘤的早期篩選是親和力評估為主，確定合適的候選抗體后就需要安排細胞內化評估。
A：常規不會變化，但是如果修飾了paylaod 之后會有變化的可能，這就是為什么裸抗也需要測內化。候選分子的確內化好，親水好是策略，但是linker和payload的疏水性會對整個藥物的穩定性，有影響，也需要綜合考慮。
A：以ADC藥物為例，ADC藥物進入癌細胞后發生降解，降解后重新形成藥物小分子。細胞利用細胞泵這樣的系統刺激外原物質外排，小分子（payload）外排后會通過小分子通道進入到周邊的細胞，對周邊細胞產生殺傷作用，進而對周邊細胞進行擴散殺傷，這個就是所謂的旁觀者效應。主要是在實體瘤中比較關注。
應用場景：
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免疫、抗體篩選
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SPR、細胞活性檢測
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免疫原性檢測
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血藥濃度分析
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驗證數據
>SEC-MALS驗證高純度（>90%）
The purity of Human Her2, Mouse IgG2a Fc Tag(Cat. No. HE2-H5255) was more than 90% and the molecular weight of this protein is around 225-245 kDa verified by SEC-MALS
Anti-LIV-1 mAb immobilized on CM5 can bind Human LIV-1, Fc Tag (Cat. No. LV1-H5254) with an affinity constant of 1.74 nM as determined in a SPR assay (Biacore T200) (Routinely tested).
Loaded Anti-Human ROR1 MAb (Mouse IgG1) on AMC Biosensor, can bind Human / Cynomolgus / Rhesus macaque ROR1, His Tag (Cat. No. RO1-H522y) with an affinity constant of 10.2 nM as determined in BLI assay (ForteBio Octet Red96e) (Routinely tested).
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