作為新興技術，mRNA疫苗通過脂質納米顆粒（LNP）將mRNA導入體內表達抗原蛋白，從而刺激機體產生特異性免疫反應。新冠肺炎疫情（COVID-19）爆發后，針對性的mRNA疫苗在多種疫苗類型中脫穎而出。與此同時，諸如自復制mRNA和circRNA等新型路線也逐漸走入大眾視野，隨著資本的大量涌入，circRNA技術迅速發展起來。

circRNA分子呈共價閉合環狀結構，不含5’-Cap和3’-polyA結構，不易被RNase降解，具有較高的穩定性，因而大大延長了其半衰期，從而達到低劑量長時效的目的。此外circRNA因為不需要修飾核苷和加帽加尾等操作，所以還有相對簡單的生產工藝優勢。與mRNA相同，前期線性RNA的獲得均來組線性化質粒的體外轉錄，而后根據其環化工藝的不同，circRNA的人工制備大致分為三個類型：I型內含子自剪切、Ⅱ型內含子自剪切和T4 RNA連接酶。大致流程如下：

在環化結束后，需要通過系列純化手段對circRNA進行高純度回收，由于不同環化方式的效率差異，RNase R的引入，有效去除未環化的線性RNA，從而達到純化circRNA的目的。RNase R來源于大腸桿菌RNR超家族，是一種鎂離子依賴性的3'—5'核糖核酸外切酶，可從3'—5'方向將RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R幾乎能夠消化所有線性的RNA，但不易消化環狀RNA、套索結構RNA和3'端突出少于7個核苷酸的短雙鏈RNA分子。通常用來消化線性RNA以富集circRNA或套索結構RNA。近岸蛋白經過系列驗證，重磅推出高活性GMP級RNase R（目錄號：GMP-E224）。GMP級產品采用藥用規格原輔料生產，嚴格控制宿主核酸殘留污染，符合GMP規范的產品生產與質量管理規程，保障生產過程及所有原輔料可追溯。

質量控制

應用實例

RNase R針對Total RNA、ssRNA及circRNA的消化實驗，實驗證明， RNase R可以消化絕大部分的總 RNA樣品，完全消化ssRNA樣品，對circRNA樣品起到良好的純化效果。

為了進一步驗證RNase R對環狀RNA無酶切作用，利用qPCR方式檢測經RNase R（藍色：近岸蛋白；綠色：對照品牌）消化后的總RNA樣品中hsa_circKIF12a和hsa_circVapa基因的豐度變化，結果顯示，與陰性組（橙色）相同，兩個基因的豐度基本沒有變化，而經RNase A（粉色）消化的樣品中基因豐度明顯下降，表明環狀RNA耐受RNase R的消化。

隨著序列設計的不斷優化，環化工藝的進一步探索，伴隨circRNA的各項技術壁壘也將會逐步打破。國外以ORNA Therapeutics和Laronde為代表，國內環碼生物、科銳邁德、圓因生物等公司先后成立布局circRNA，越來越多的研發管線來滿足臨床治療需求，circRNA未來可期。

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