這個故事先從抗體藥的現狀開始吧：
1986-2017 年的 31 年間，共有 157 個治療性生物大分子藥獲 FDA 批準上市，其中抗體藥最多，共 81 種。甚至 2016、2017 年所有獲批上市的生物大分子藥均是抗體藥，一個月前EMA批準諾菲納米抗體藥物成為第一個上市的納米抗體藥物的文章刷遍生物人的朋友圈，國內方面，康寧杰瑞率先申報靶向PD-L1的納米抗體KN035，并隨后獲得FDA批準臨床研究。
有媒體這樣描述：“整個抗體藥產業正處于一個令人激動的Turning Point時期！“目前，抗體藥市場一路高歌，是生物藥中的王牌，也是各藥企巨頭的必爭之地。
抗體藥的發展的迅速有目共睹，隨著市場規模的日漸擴大，政策的支持，資本的青睞，預示著整個抗體藥產業將會有更好的發展。恒瑞醫藥、康弘藥業、康寧杰瑞、百濟神州以及眾多企業也紛紛涌入抗體藥市場。
一場來自抗體藥開發和免疫原性的戰爭也與之拉開序幕。。。
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從諾和諾德長效重組Factor Ⅶ在臨床Ⅲ期被叫停，到輝瑞PCSK9抑制劑在臨床Ⅲ期宣布放棄開發，免疫原性帶來的問題一次次給抗體藥物開發下了絆子。
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如何發現免疫原性的問題呢，如何讓免疫原性和抗體藥物開發的問題被提早發現呢？
免疫原性分析作為免疫原性評價的重要手段是時候站出來了。
但是，免疫原性分析一直以來缺乏明確的可操作的指導原則。
FDA老大哥表示，路總是要走的，問題總是要解決的。于是繼2009版免疫原性指導原則之后，2016版FDA免疫原性指導原則（試行）的發布給免疫原性分析指明了道路，把兩個相隔7年的制度原則進行比較，我們可以發現以下變化：
- 2016版指導原則推薦使用基于風險的方法來評價免疫反應及其帶來的副作用；
- 篩選和確證試驗的方法靈敏度至少達到100ng/mL，遠遠小于之前要求的250-500ng/mL；
- 對確證和滴度試驗做了詳細說明；
- 對方法學建立和驗證的時間做了更加詳細的說明；
- 增加了關于糖基化、Fc融合、ADC等內容的討論；
- 對于生物類似藥，要用一套標準試驗來真實對比類似藥和原研藥的ADA水平。
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免疫原性的評價方式主要采用抗藥抗體（anti-drug antibody, ADA）分析的方法進行。分析技術包括ELISA、ECL、SPR、RIA、MSD等，可靈活采取一種或幾種組合，目前最常用的技術是ELISA和MSD。試驗設計為多步檢測法，包括篩選、確證、滴度和中和試驗：
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- 篩選試驗（screening assay）：也叫結合抗體（binding antibody, BAb）試驗，用來檢測所有能夠結合到蛋白藥的抗體，這是第一步；
- 確證試驗（confirmatory assay）：加入蛋白藥競爭來確證Bab的特異性；
- 滴度試驗（titering assay）：確定ADA產生的強度；
- 中和試驗（neutralizing assay）：評估產生的ADA是否具有中和能力，推薦使用cell-based assay。
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由于不可能將受試者體內的所有抗藥抗體作為陽性對照，無法準確反映樣本中抗藥抗體的真實情況，免疫原性分析只能采用半定量的方式進行，一般都是使用內部開發的單克隆抗體或多克隆抗體。
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為了解決免疫原性分析的問題以縮短抗體開發時間，ACROBiosystems公司開發了一系列高親和力、高特異性的抗獨特型抗體，應用于免疫原性分析。我們根據開發人員的實際應用場景，對每一個抗獨特性抗體開發相應的實驗方案，希望最大程度上加速藥物研發的進程。
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以下為應用案例：?
>>>>應用案例一：Anti-Adalimumab Antibodies（ADB-Y19）
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Anti-Adalimumab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized adalimumab at 1 μg/ml, added increasing concentrations of Anti-Adalimumab Antibodies (Cat. No. ADB-Y19, 10% human serum) and then added biotinylated adalimumab at 5 μg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 0.6 ng/mL.?
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Measured by its neutralizing ability in a functional ELISA. Immobilized adalimumab at 0.5 μg/mL (100 μL/well) can bind pre-mixed Anti-Adalimumab Antibodies (Cat. No.ADB-Y19) and Biotinylated Human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) with an inhibition rate of 100%.?
>>>>應用案例2- Anti-Rituximab Antibodies（RIB-Y35）
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Anti-Rituximab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized rituximab at 5 μg/ml, added increasing concentrations of Anti-Rituximab Antibodies (Cat. No.RIB-Y35, 10% human serum) and then added biotinylated rituximab at 5 μg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 20 ng/mL.?
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Measured by its neutralizing ability in FACS. The data shows that the binding of rituximab to 293F overexpressing CD20 was inhibited by increasing concentrations of Anti-Rituximab Antibodies (Cat. No.?
RIB-Y35). The concentration of rituximab used is 10 ng/ml. The IC50 is 0.013 μg/ml.?
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同時，對于每一個產品，ACROBiosystems還做了一系列實驗來保證產品的高親和力、高特異性和高穩定性。目前產品已覆蓋adalimumab, rituximab, cetuximab, trastuzumab, bevacizumab等多個已上市的熱門抗體藥。 ? >>>>高親和力
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親和力代表了抗原和抗體間的結合強度，用KD值表示，KD值越小，抗體的親和力越強。我們用SPR方法檢測了所有抗獨特型抗體的親和力，了解這一指標，有助于在方法學建立過程中預測檢測方法的靈敏度。
Anti-Adalimumab Antibodies (mouse IgG1, Cat. No. ADB-Y19) captured on CM5 chip via anti-mouse antibodies surface, can bind human adalimumab with an affinity constant of 1.36 pM.
? >>>>高特異性
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對于每一個產品，我們都進行了特異性檢測，包括對應的抗體藥、抗體藥靶點、不同IgG亞型和同亞型其他抗體藥，只有結合對應的抗體藥，而不結合其他蛋白或抗體的產品才會被放行。
Demonstration of the specificity of Anti-Cetuximab Antibodies (Cat. No.?CEB-Y28) to the cetuximab.
? >>>>高穩定性
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為確保產品穩定性，ACROBiosystems會做加速實驗和凍融實驗來驗證產品穩定性，只有經過測試證實質量和活性沒有任何影響的產品才會被放行。
Accelerated Stability Test
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Reconstituted Anti-Trastuzumab Antibodies were diluted to 0.4 mg/ml, aliquoted and placed at 37°C. Aliquots were removed from 37°C at every time point and placed at 4°C along with the control. No significant loss of activity was observed.
? Freeze-thaw Test
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Anti-Trastuzumab Antibodies were subjected to the indicated number of freeze-thaw cycles (FT). No significant loss of activity was observed.
? >>>>產品列表（不斷更新中）
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? ? Cat. No. |
? ? Antigen |
? ? Neutralizing Activity |
? ? Affinity KD, nM |
? ? Application |
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? ? Adalimumab F(ab’)2 |
? Neutralizing Antibody ? ? |
? 0.0013 ? ? |
? ADA assay ? ? ? Neutralizing assay ? ? ? Indirect ELISA ? ? |
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? ? Cetuximab F(ab’)2 |
? Neutralizing Antibody ? ? |
? 0.0015 ? ? |
? ADA assay ? ? ? Neutralizing assay ? ? ? Indirect ELISA ? ? |
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? ? Rituximab F(ab’)2 |
? Neutralizing Antibody ? ? |
? 0.03 ? ? |
? ADA assay ? ? ? Neutralizing assay ? ? ? Indirect ELISA ? ? |
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? ? Bevacizumab F(ab’)2 |
? Neutralizing Antibody ? ? |
? 0.0828 ? ? |
? Neutralizing assay ? ? ? Indirect ELISA ? ? |
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? ? Bevacizumab F(ab’)2 |
? Neutralizing Antibody ? ? |
? 1.92 ? ? |
? ADA assay ? ? ? Indirect ELISA ? ? |
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