當多重PCR遇上復雜樣本:不要猶豫,做直擴!-技術前沿-資訊-生物在線

當多重PCR遇上復雜樣本:不要猶豫,做直擴!

作者:蘇州近岸蛋白質科技股份有限公司 2026-01-15T00:00 (訪問量:18779)

直擴PCR(Direct PCR)是一種無需核酸提取步驟、可直接對原始生物樣本(如血痕、血卡、唾液斑及現場混合檢材)進行擴增的技術。該技術通過簡化操作、提升效率并降低成本,正推動法醫檢測進入免提取的精準時代,顯著縮短鑒定時間,同時減少樣本損耗與污染風險。2024年,美國國家司法研究所的報告明確將直接PCR視為提升現場“痕量DNA”證據分析速度、簡化流程的關鍵技術。

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圖示.直擴PCR流程[1]

該技術的核心在于采用了經深度優化的高耐受性DNA聚合酶和專用緩沖體系,能夠有效克服血紅素、環境降解產物及各類常見PCR抑制劑的干擾,從而在復雜的現場生物檢材中仍能保證擴增的穩定性與可靠性。

 

近岸蛋白HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)(Cat. No.: E285-03) ,一款專為多重PCR 和高要求擴增場景設計的無甘油熱啟動Taq酶。

產品應用

基因組分型、司法鑒定、高通量遺傳鑒定分析、多重病原體檢測等。

產品特點

強耐受性

對血紅素、腐殖酸等常見PCR抑制劑表現強耐受性(抗腐殖酸可達70 ng/T,抗血紅素可達12 μM),確保在復雜樣本中依然可以穩定擴增。

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強穩定性-37℃加速

37℃放置7天能穩定檢出低至4 pg的cDNA模板;

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37℃放置9天,酶量低至0.625 U時,可穩定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板;

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37℃放置9天,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

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強穩定性-反復凍融

經過25次凍融,試劑仍能穩定檢測到低至400 fg的微量cDNA模板;

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經過25次凍融后,低至0.625 U的酶量可穩定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板;

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經過25次凍融后,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

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強穩定性-模擬運輸

試劑模擬運輸96 h后,37℃放置7天能穩定檢出到低至4 pg的cDNA模板;

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試劑模擬運輸96h后,37℃放置7天,酶量低至0.625U能穩定檢出含有25%豬血背景的4ng cDNA模板;

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試劑模擬運輸96h后,37℃放置7天,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

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更快的熱啟動

預變性時間可縮短至95℃ 30s,與2min效果無顯著差異,進一步縮短熱啟動時間。

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客戶實測

本次實驗在優化條件下,比較了兩種擴增酶對磁珠提取的血液DNA樣本進行30重STR分型的檢測性能。毛細管電泳(CE)結果顯示,兩者在200–500?bp 范圍內均呈現出清晰、分離度良好的峰,無明顯雜峰或引物二聚體,表明擴增效率相當且特異性高。

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同樣,在Chelex粗處理DNA的擴增性能表明兩種擴增酶也表現出較高的一致性。

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?產品信息

目錄號
E285-03
產品名稱
HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)
規格
10 U/μl
20 U/μl
1 KU
5 KU
10 KU
10 KU
20 KU

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產品分類
產品貨號
產品名稱
簡介
試劑盒
RNA靶標
E495
NovoScript® FAST Probe One Step qRT-PCR Kit (UDG)
探針法qRT-PCR快速檢測試劑盒,兼容快速程序,高耐受性
DNA靶標
E501
NovoStart® Universal Probe qPCR SuperMix(UDG)
通用性好,無需ROX校準;支持引物探針提前預混
單酶
雙封閉抗體
Z088
NovoStart® Double-Block Taq Antibody
雙位點封閉、高特異性的Taq DNA 酶抗體
單封閉抗體
Z087
Taq antibody
高特異性熱穩定的Taq 酶抗體,具有極高的純度和批次穩定性
熱啟動酶
E208
HotStart UltraTaq DNA Polymerase
雙封閉抗體法修飾的Taq DNA 聚合酶,可支持全預混體系搭建
E097
HotStart Taq DNA Polymerase (B)
特異性好且靈敏度高的的熱啟動Taq酶
逆轉錄酶
E226
NovoScript® Ⅲ Reverse Transcriptase
三代逆轉錄酶,高靈敏度,50℃逆轉錄
熱敏UDG
E063
Heat-labile UDG
55°C 10min 使酶發生不可逆失活,兼容常見的 PCR 反應體系

 

參考文獻

[1] U.S. Deppartment of Justice (NIJ). Improving Analysis of “ Trace DNA” Evidence.

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