直擴PCR(Direct PCR)是一種無需核酸提取步驟、可直接對原始生物樣本(如血痕、血卡、唾液斑及現場混合檢材)進行擴增的技術。該技術通過簡化操作、提升效率并降低成本,正推動法醫檢測進入免提取的精準時代,顯著縮短鑒定時間,同時減少樣本損耗與污染風險。2024年,美國國家司法研究所的報告明確將直接PCR視為提升現場“痕量DNA”證據分析速度、簡化流程的關鍵技術。

圖示.直擴PCR流程[1]
該技術的核心在于采用了經深度優化的高耐受性DNA聚合酶和專用緩沖體系,能夠有效克服血紅素、環境降解產物及各類常見PCR抑制劑的干擾,從而在復雜的現場生物檢材中仍能保證擴增的穩定性與可靠性。
近岸蛋白HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)(Cat. No.: E285-03) ,一款專為多重PCR 和高要求擴增場景設計的無甘油熱啟動Taq酶。
產品應用
基因組分型、司法鑒定、高通量遺傳鑒定分析、多重病原體檢測等。
產品特點
強耐受性
對血紅素、腐殖酸等常見PCR抑制劑表現強耐受性(抗腐殖酸可達70 ng/T,抗血紅素可達12 μM),確保在復雜樣本中依然可以穩定擴增。

強穩定性-37℃加速
37℃放置7天能穩定檢出低至4 pg的cDNA模板;

37℃放置9天,酶量低至0.625 U時,可穩定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板;

37℃放置9天,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

強穩定性-反復凍融
經過25次凍融,試劑仍能穩定檢測到低至400 fg的微量cDNA模板;

經過25次凍融后,低至0.625 U的酶量可穩定檢出含有25%豬血背景的4 ng cDNA模板;

經過25次凍融后,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

強穩定性-模擬運輸
試劑模擬運輸96 h后,37℃放置7天能穩定檢出到低至4 pg的cDNA模板;

試劑模擬運輸96h后,37℃放置7天,酶量低至0.625U能穩定檢出含有25%豬血背景的4ng cDNA模板;

試劑模擬運輸96h后,37℃放置7天,酶量低至0.164 U時,體系仍能有效擴增,并可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測到預期條帶。

更快的熱啟動
預變性時間可縮短至95℃ 30s,與2min效果無顯著差異,進一步縮短熱啟動時間。

客戶實測
本次實驗在優化條件下,比較了兩種擴增酶對磁珠提取的血液DNA樣本進行30重STR分型的檢測性能。毛細管電泳(CE)結果顯示,兩者在200–500?bp 范圍內均呈現出清晰、分離度良好的峰,無明顯雜峰或引物二聚體,表明擴增效率相當且特異性高。

同樣,在Chelex粗處理DNA的擴增性能表明兩種擴增酶也表現出較高的一致性。

?產品信息
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參考文獻
[1] U.S. Deppartment of Justice (NIJ). Improving Analysis of “ Trace DNA” Evidence.
