Q：請問如何進行磁珠殘留方法驗證?

A：最好的辦法是讓磁珠供應商來保證在整個流程中使用的磁珠的殘留量是多少，若有磁珠殘留，這個殘留值是安全的。

Q：CAR-T作為個性化的細胞產品，僅通過標簽進行溯源質控，是否嚴謹，有沒有檢測方法可以幫助確認？

A：實際上通過監管鏈（CoC）和供應鏈（CoI）就非常嚴謹，這是從源頭到源頭的追蹤，如果說還不放心的話，可以使用STR驗證下最開始病人的采樣品和最終輸進去的產品是不是匹配，但是監管鏈（CoC）和供應鏈（CoI）我覺得已經完全滿足了。

Q：不同型號單采機，不同操作者對單采質量有影響嗎？

A：會的，不同醫院的單采血，在單采的細胞量和單采體積會有影響的，而且影響還是很大的。

Q：怎么降低CAR T產品的成本？

A：降低CAR-T成本的一個要點是原材料要國產化，比如慢病毒和磁珠是國產的還是進口的，價格是不一樣的，還有生產慢病毒用的細胞如果是貼壁細胞，生產通量就很低，如果技術突破后能使用懸浮細胞，慢病毒的價格就會降下來；另外一個要點為使用的是自動化全封閉的還是手動的生產工藝，其中，進口的自動化全封閉管道是非常貴的，這會導致CAR-T價格相差極大。所以說從工藝和材料上都要加以評估，在保證產品安全的前提下，把價格降下來。

Q：一個CAR-T劑量需要多少滴度的病毒？

A：這要看慢病毒的MOI（感染復數），因為每個批次的滴度都是不一樣的，做CAR-T轉染的時候，還是建議測一下MOI，確定最終用的滴度量。不要認為是同一個生產廠商生產的慢病毒，就不做MOI，建議要測一下。

A：實際上使用慢病毒是最好的，因為它的轉染效率最高。那怎樣能達到較高病毒滴度呢？這要看慢病毒包裝載體質粒是怎么設計的，比如啟動子的設計，另外，同樣的包裝質粒和輔助質粒，送到不同的公司后有可能滴度是不一樣的，所以說，一定要讓生產慢病毒的公司做好驗證，保證滴度是合格的。

A：主要從CAR-T結構設計上面去考慮，例如除了親和力之外，還有內部的信號通路，可以去做一些優化，將增強殺傷功能的一些組件構建進去。比如 CD28或者4-1BB都是有各自功能的，CD28可以增強細胞殺傷活性，4-1BB可以延長存續時間，可以去做些這方面的優化，實現提高殺傷活性的作用。

Q：小鼠體內實驗的話，外周血CAR 陽性率檢測用流式比較好還是CAR基因拷貝數呢？

A：其實兩種方式同時進行會比較理想的，不建議單獨用一種方式去檢測。基因拷貝數檢測和流式檢測可以會互為參照，這是從基因水平和蛋白水平分別做的檢測。甚至也可以從mRNA水平上檢測。因為CAR的基因表達是從基因水平轉錄成mRNA再翻譯成蛋白，所以每個階段都可以用相應的指標來說明CAR陽性率。

Q：FDA DMF備案產品和其他產品有什么差別？

A：FDA有一個備案制，比如，藥物生產過程中使用的原材料，可將其工藝、質控標準等資料遞交給FDA，如果申報臨床的項目用到了這個原材料，當去FDA申報臨床的時候，可引用該原材料的備案編號給FDA，FDA就可以直接查閱其信息。如果原材料沒有FDA DMF備案，就需要跟原材料供應商索要相關資料，然后整合到遞交臨床申請的材料里面才能完成申報，所以對于DMF備案的產品是在申報過程中準備材料上面省力一些。

A：需要的，因為我們之前也做ADA的抗體，檢測了很多克隆號的抗體，發現不同克隆號抗體之間的親和力有差異，所以肯定是需要驗證的。

A：主要有兩方面原因，一方面是檢測試劑的靈敏度不夠高，另一方面是雖然轉導進去了CAR基因，但并不是每個細胞的轉導量都是一樣的，導致一個細胞群里面出現表達量高、表達量低、表達量處于中間等不同狀態的細胞，所以就可能會出現分群不是特別明顯的情況。

A：抗獨特型抗體是指針對抗體分子可變區上的特異抗原表位群的抗抗體。在CAR-T領域，其制備通常是將CAR的scFv作為免疫原免疫動物，經過篩選得到的一系列抗體?？煞譃橛兄泻突钚院蜎]有中和活性的抗獨特性抗體，都可以用在質控放行中，其中，中和活性的抗獨特性抗體可特異性結合抗原識別表位；另外，在進行臨床PK研究時，使用具有中和活性的抗獨特性抗體，可以檢測到游離的CAR-T細胞（指沒有跟體內抗原結合的CAR-T細胞），而使用沒有中和活性的抗獨特性抗體，檢測的是總的CAR-T細胞量（包括跟體內抗原結合和沒有結合的CAR-T細胞）。

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