體外血腦屏障（BBB）模型是研究藥物或分子穿過BBB能力的重要工具。本文以bEnd.3細胞（小鼠腦微血管內皮細胞）和U251細胞（人膠質瘤細胞）共培養為例，介紹構建體外BBB通透性實驗。
首先，將U251細胞以接種于Transwell下室，使用DMEM培養基（含10% FBS和1% PS）在37℃、5% CO?條件下培養。U251細胞模擬星形膠質細胞的功能，為BBB模型提供支持作用，增強屏障的緊密性和功能性。接種后，Transwell倒置培養5-6小時，使U251細胞附著，隨后恢復正置繼續培養。
第二天，將bEnd.3細胞接種于Transwell上室，使用1640培養基（含10% FBS和1% PS）培養。每天更換培養基（上室200 μL，下室600 μL），共培養6-7天，形成緊密的屏障。實驗前，Transwell膜需用鼠尾膠原蛋白和纖連蛋白包被，以促進細胞附著。
實驗時，在Transwell上室加入含測試樣品（如肽、抗體或納米顆粒）的培養基，下室加入完全培養基。孵育后，于特定時間點（如2小時、4小時）收集下室液體。使用熒光標記物（如FITC-Dextran）作為對照，通過熒光分光光度計檢測樣品濃度，計算轉胞效率（TE）。
通透性計算公式為：
通透性 (%) = (基底側濃度 × 基底側體積) / (樣品側濃度× 樣品側體積) × 100%。
該實驗通過模擬BBB的復雜微環境，評估藥物或分子穿過BBB的能力，為中樞神經系統（CNS）藥物開發提供重要依據。U251細胞在模型中模擬星形膠質細胞的支持作用，顯著增強了BBB的緊密性和功能性，使模型更接近體內BBB的特性。bEnd.3和U251雙細胞共培養模型適用于高通量篩選、大分子藥物滲透性研究及BBB轉運機制探索。
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體外BBB模型中的通透性（轉胞吞作用）檢測平臺：
我們用hCMEC/D3， bEnd.3 和U251構建了一系列的體外血腦屏障模型用于檢測抗體透過血腦屏障的通透性。
