在分子生物學研究的日常工作中,PCR 是最常用也最關鍵的實驗技術之一。從基礎的DNA 片段擴增,到復雜的基因克隆、突變分析、測序驗證,PCR的準確性和效率直接決定了后續實驗的成敗。
然而,實驗人員往往面臨著各種挑戰:
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模板復雜,擴增效率低;
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長片段難以獲得,易出現片段丟失;
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擴增時間過長,影響整體實驗進度;
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錯配與突變頻率高,影響數據可靠性。
科研人員常常感嘆:“PCR才是最考驗科研人耐心的環節。”
為了幫助大家解決這一系列難題,近岸蛋白重磅推出新一代高保真PCR預混液——2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load)(Cat.No.:E185)。它不僅在保真度上達到100倍提升,更能輕松擴增長達40 kb的復雜基因模板,最快擴增速度可達1s/kb,可擴增GC含量高達82.8%的片段,同時對PCR抑制劑具有良好的抵抗能力,適用于1%-20%全血、鼠尾裂解、腐殖酸、細菌等樣本的直接PCR,為復雜樣本PCR提供可靠解決方案。
五大核心優勢
保真性高:保真度為普通Taq酶的100倍
快速高效:2 kb以下片段,延伸速度快至1s/kb
長片段擴增:λDNA、人gDNA擴增可達40kb
靈敏性高:可擴增低至1pg的λDNA
穩定強:室溫放置24h,性能不變
性能展示
1 高保真性達100倍

圖1. 采用二代測序方法,測定不同聚合酶的擴增保真度。結果顯示, 2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load) 保真度是Taq DNA Polymerase的100倍。
2 快速長片段擴增
復雜模板快速長片段擴增

圖2. 20μl擴增體系中,以Human gDNA為模板,擴增1 kb-40 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,擴增速度快,2 kb以內片段延伸速度可達1s/kb,20 kb以內片段延伸速度可達5s/kb。(泳道MK:DNA Ladder 10000,Cat.No.: DM033)
簡單模板快速長片段擴增

圖3. 20μl擴增體系中,以λDNA為模板,擴增500 bp-40 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,擴增速度快,2 kb以內片段延伸速度可達1s/kb,20 kb以內片段延伸速度可達5s/kb。(泳道MK1:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005;泳道MK2:DNA Ladder 10000,Cat.No.: DM033)
3 兼容多種特殊樣本擴增
1%-20%全血

圖4. 以1%-20%全血為模板,擴增2 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,兼容不同血液模板。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
菌落直擴

圖5. 以大腸桿菌菌落為模板,挑取單菌落擴增2 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,兼容菌落直擴。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
鼠尾裂解液直擴

圖6. 以鼠尾裂解液為模板,擴增2 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,兼容鼠尾直擴。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
腐殖酸抗性

圖7. 以Human gDNA為模板,添加不同濃度腐殖酸,擴增1 kb片段。結果顯示,E185擴增性能優異,兼容0.05%-0.08%腐殖酸模板。(泳道MK:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005)
4 片段GC含量最高可達82.8%

圖8. 以Human gDNA為模板,擴增不同GC含量片段。結果顯示,E185擴增性能優異,兼容不同GC含量片段擴增,特異性高。(泳道MK:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005)
5 靈敏性最低可達1pg

圖9. 以λDNA為模板,擴增4 kb片段。結果顯示,E185靈敏度可達1pg。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
6 穩定性強

圖10. 加熱穩定性、室溫穩定性和凍融穩定性測試。結果顯示,E185在37℃條件下放置7天性能穩定,室溫放置24h性能穩定,反復凍融20次性能穩定。(FTC0:凍融0次;FTC20:凍融20次)

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