輔助型T細胞2（T helper 2 cell，Th2）是 CD4+T 細胞在 IL-4 等細胞因子誘導下分化的功能性亞群，它既能對抗胞外寄生蟲、參與組織修復，也可能在免疫失衡時引發過敏、哮喘等疾病。其功能的關鍵在于分泌 IL-4、IL-5、IL-9、IL-10、IL-13 等細胞因子，調控 B 細胞活化、IgE 生成及炎癥反應[1]。
Th2 細胞研究進展
近年來， Th2 細胞在哮喘、過敏性炎癥及相關免疫疾病領域取得了顯著進展。
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2024年10月，匹茲堡大學的研究指出，塵螨通過激活 Th2 細胞引發過敏性哮喘，且 IL-2 和 IL-10 在 Th2 細胞形成中起關鍵作用[3]。 -
2024年11月，四川大學華西醫院聯合陸軍軍醫大學團隊在《Immunity》上發表研究，揭示了 HIF2α 通過調控磷脂代謝促進致病性 Th2 細胞分化的機制，為哮喘精準治療提供了新靶點[2]。 -
2025年5月，研究指出 TRIM28 通過調控 Mettl5 的泛素化和 Gata3 的轉錄，進一步揭示了 Th2 極化的分子機制[9]。 -
針灸在哮喘治療中的作用也受到關注，研究表明其可能通過調節第2組先天淋巴樣細胞（ILC2）的功能影響Th2介導的炎癥反應[10]。
Th2細胞誘導機制[4]
IL-4 （核心動力）
IL-4 與初始 T 細胞表面 IL-4R 結合后啟動分化程序，激活 Jak-Stat6 信號通路，誘導核心轉錄因子 GATA3 表達，促使初始 T 細胞向 Th2 細胞分化。
IL-2（輔助調控）
IL-2 與 T 細胞表面的 IL-2 受體（IL-2R）結合后，激活 JAK1/3 激酶，進而磷酸化信號轉導與轉錄激活因子 5（STAT5），促進 IL-4 表達，同時抑制 Th1 分化。
抗IFN-γ抗體
抗IFN-γ抗體抑制 Th1 細胞分化，減少 Th1 細胞因子的產生，從而有利于 Th2 細胞的分化。
其他關鍵因子
IL-6 協同 IL-4 啟動分化，IL-33 增強 GATA3 活性，IL-13 參與終末分化等。
圖1：Th2細胞分化示意圖[4]
Th2細胞分化誘導實驗流程[5,6,7,8]
01 試劑耗材
02 Native CD4+T細胞分離
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PBMC分離：按照 Lymphoprep™ 說明書進行 PBMC 分離；
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CD4+細胞富集：用 CD4+ 分離試劑盒從PBMC或組織細胞懸液中分離 CD4+T 細胞；
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流式分選：將初始 CD4+T 細胞按照 CD4+CD25-CD62L+CD44-CD45RA+CD45RO- 細胞群體進行分選。
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分選得到的細胞后，用完全培養基重懸細胞并進行計數，將細胞濃度調整為1×106個/mL。
03 Th2細胞分化誘導
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提前將培養皿包被抗 CD3 抗體和抗 CD28 抗體，過夜4℃孵育，使用前用PBS洗滌2次。
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第二天將細胞接種至培養皿，并在培養體系中加入50 U/mL 的 rhIL-2、12.5 ng/mL的 rhIL-4、5-10 ug/mL 的抗 IFN-γ 抗體和 5-10 ug/mL的抗IL-10抗體，培養4 天（這4天細胞會經歷激活和增殖的過程）。
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4天后，細胞在相同的培養條件下繼續培養 3 天進行細胞擴增。
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重刺激：每7天，細胞可以使用抗CD3抗體和抗CD28抗體，或者用 PMA 和 Ionomycin激活細胞4小時，以維持細胞的活性和增殖能力。用 PMA 和 Ionomycin 激活靜息細胞4小時后，加入 Monensin 進行最后2小時的激活。
注意事項：PMA具有毒性，操作需戴手套；刺激時間嚴格控制，避免細胞過度活化。
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Th2多次循環誘導：以每周為間隔，重復上述 Th2 極化和細胞擴增的步驟，進行多次循環誘導。在每7天為一個時間點，都使用 PMA、Ionomycin和Monensin 刺激細胞 6小時。
注意事項：每次傳代保持細胞密度 1×10?個 /ml，及時更換培養基避免代謝廢物積累。
Th2細胞培養鑒定[5,11,12]
01 細胞內細胞因子染色（ICS）
方法：收集細胞，經7-amino-actinomycin D處理后，用 Cytofix/Cytoperm 試劑盒固定破膜，加入 PE 標記抗 IL-4、IL-5、IL-13 等抗體染色，流式細胞儀分析。
結果：分化第 28 天，約 28% 細胞同時表達 IL-4、IL-5、IL-13，40% 細胞至少表達其中兩種（韋恩圖顯示三者協同表達）；IL-13 在早期表達較高，IL-4、IL-5 隨分化逐漸增加。
圖2：Th2細胞因子共表達韋恩圖[5]
02 轉錄因子檢測（GATA3）
方法：實時熒光定量PCR檢測GATA3 mRNA表達，或WB檢測胞內GATA3蛋白。
結果：Th2 分化過程中GATA3表達持續上調，與IL-4、IL-13表達呈正相關，證實 Th2細胞特性穩定。
圖3：Th2細胞GATA3蛋白表達情況[12]
03 細胞因子分泌檢測（ELISA）
方法：收集細胞上清，檢測IL-4、IL-5等細胞因子濃度。
結果：Th2誘導組上清中IL-4濃度顯著高于對照組，再刺激后分泌量進一步增加，表明細胞功能活躍。
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參考文獻
[1]Wynn, T. A. (2015). Type 2 cytokines: mechanisms and therapeutic strategies. Nature Reviews Immunology, 15(5), 271-282.
[2]Zou, X., Wang, K., Deng, Y., Guan, P., Pu, Q., Wang, Y., Mou, J., Du, Y., Lou, X., Wang, S., Jiang, N., Zhou, S., Wang, H., Du, D., Liu, X., Hu, H., & Zhang, H. (2024). Hypoxia-inducible factor 2α promotes pathogenic polarization of stem-like Th2 cells via modulation of phospholipid metabolism. Immunity, 57(12), 2808–2826.
[3]He K, Xiao H, MacDonald WA, et al. Spatial microniches of IL-2 combine with IL-10 to drive lung migratory TH2 cells in response to inhaled allergen. Nat Immunol. 2024 Nov;25(11):2124-2139.
[4]Stark, J. M., Tibbitt, C. A., & Coquet, J. M. (2019). The Metabolic Requirements of Th2 Cell Differentiation. Frontiers in Immunology, 10, 2318.
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[6]Upadhyaya, Bhaskar, Yuzhi Yin, Brenna J. Hill, Daniel C. Douek, and Calman Prussin. "Hierarchical IL-5 expression defines a subpopulation of highly differentiated human Th2 cells." The Journal of Immunology, vol. 187, no. 6, 2011, pp. 3111–3120. DOI:10.4049/jimmunol.1101283.
[7]Flaherty, Stephanie, and Joseph M. Reynolds. "Mouse Naïve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets." Journal of Visualized Experiments, vol. 98, 2015, p. e52739. DOI:10.3791/52739.
[8]Cheng, Y., et al., EvaluaLin, Y., Zhang, D., Li, Y., Li, Y., Li, B., & Du, M. (2021). Decidual NR2F2-Expressing CD4+ T Cells Promote TH2 Transcriptional Program During Early Pregnancy. Frontiers in Immunology, 12, 670777.
[9]Miao, Beiping et al. “TRIM28 mediates Mettl5 ubiquitination to promotes Th2 polarization.” Frontiers in immunology vol. 16 1524633. 5 May. 2025, doi:10.3389/fimmu.2025.1524633.
[10]董敏, 李好, 潘嘉欣, 等. 針刺調控哮喘相關第2組先天淋巴樣細胞功能的研究進展[J]. 新醫學, 2024, 55(11): 950-956. DOI:10.3969/j.issn.0253-9802.2024.11.013.