BMDM，即骨髓來源巨噬細胞（Bone Marrow-Derived Macrophage），是一種從小鼠骨髓中分離并體外誘導分化的原代巨噬細胞。通常用于藥物篩選或研究特定基因在巨噬細胞功能中的作用。然而在BMDM中進行轉染并非易事。
由于BMDM是原代免疫細胞，增殖能力弱、極易被激活引發炎癥，且胞內核酸酶豐富，會快速降解外源基因，往往導致常規方法轉染效率極低。
Arcegen推出由新型多聚體高分子材料開發的升級版核酸轉染試劑：Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010），轉染效率極高且細胞毒性極低，能夠滿足各種轉染需求，包括BMDM等各類難轉染細胞。
我們今天就來看下如何進行這個實驗。
所需試劑
實驗步驟
1.DNA轉染
注：轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化最佳使用量。
1） 細胞鋪板，至轉染操作時，以細胞融合度達70%-90%為佳。
2） 按照下表使用Opti-MEM培養基稀釋轉染試劑溶液，輕輕混勻。
3） 使用Opti-MEM培養基稀釋DNA，得到DNA預混液，然后添加Enhancer轉染增強劑溶液，輕輕混勻，得到稀釋的DNA。
4） 將稀釋的DNA加入已稀釋的轉染試劑溶液中(1:1比例)。
5） 室溫孵育10-15分鐘。
6） 將DNA-轉染試劑復合物逐滴加到細胞中，輕輕混勻。
2.siRNA轉染
轉染siRNA操作與DNA的轉染操作流程一樣，但在稀釋siRNA時則不需要加入Enhancer轉染增強劑。
3.mRNA轉染
轉染mRNA操作及用量與DNA的轉染操作流程一樣，但在稀釋mRNA時則不需要加入Enhancer轉染增強劑。
不同細胞培養容器轉染用量（僅供參考）：
【注】該表使用量僅供參考，DNA與轉染試劑溶液具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。
建議使用時比值保持在1:0.5-1:5之間。其中mRNA的用量及實驗條件和DNA一致；若細胞比較脆弱，導致細胞死亡較多，可以通過將增強劑減半來獲得更好的結果。
結果測試
使用綠色熒光蛋白（GFP）作為測試蛋白，通過熒光顯微鏡及流式細胞儀進行轉染效果檢測。我們使用C130010對BMDM細胞進行轉染，得到了非常好的結果，明顯優于競品。
圖 利用本試劑盒和競品T*3000分別對BMDM進行DNA轉染結果圖
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C130010 |
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| 應用于多種哺乳動物細胞培養，尤其是生長快、粘附性低的細胞、雜交瘤的骨髓瘤細胞、克隆細胞、DNA 轉染的轉化細胞等 | DMEM 高糖培養基(含L-谷氨酰胺,丙酮酸鈉110mg/L;不含 HEPES,雙抗) | C231115 |
| 產品應用 | 產品名稱 | 產品貨號 |
| 轉染DNA(小于10 kb)、RNA和寡核苷酸，可替代 Lipo2000 | Celthy Univer Liposomal Transfection Reagent Celthy Univer 脂質體轉染試劑 |
C130002 |
| DNA(小于 10 kb)、RNA和寡核苷酸，脂質體轉染，納米級 | Celthy Univer NanoLiposomal Transfection Reagent Celthy Univer納米脂質體轉染試劑 |
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