在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，快速、準(zhǔn)確地區(qū)分活細(xì)胞與死細(xì)胞至關(guān)重要。Arcegen推出的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒，依托先進(jìn)的熒光標(biāo)記技術(shù)，為細(xì)胞活死檢測(cè)提供更直觀、更高效的分析工具。
檢測(cè)原理
Calcein-AM：一種活細(xì)胞染色試劑，發(fā)綠色熒光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。 在傳統(tǒng)的Calcein（鈣黃綠素）基礎(chǔ)上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基團(tuán)，增加了疏水性，可自由進(jìn)入細(xì)胞，在活細(xì)胞內(nèi)部，被水解為具有強(qiáng)綠色熒光的Calcein，該產(chǎn)物無法透出細(xì)胞膜，從而在活細(xì)胞內(nèi)積累并發(fā)出明顯綠色熒光。細(xì)胞毒性極低，是活細(xì)胞標(biāo)記的理想選擇。
碘化丙啶（PI）：一種細(xì)胞核染色試劑，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光（Ex=535 nm, Em=617 nm）。不能通過活細(xì)胞膜，可通過死細(xì)胞或受損細(xì)胞的細(xì)胞膜，與細(xì)胞核DNA結(jié)合并產(chǎn)生紅色熒光，從而特異性地標(biāo)記死細(xì)胞。
兩種染料均可被490nm光激發(fā)，可在熒光顯微鏡下同時(shí)觀察活細(xì)胞（綠色）與死細(xì)胞（紅色），實(shí)現(xiàn)細(xì)胞活死狀態(tài)的快速判別。
產(chǎn)品特點(diǎn)
高特異性
Calcein-AM僅能被活細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解，生成Calcein，產(chǎn)生的綠色熒光信號(hào)直接反映活細(xì)胞數(shù)量；PI無法透過完整細(xì)胞膜，嚴(yán)格標(biāo)記死細(xì)胞。兩者互補(bǔ)性強(qiáng)，背景信號(hào)低，不會(huì)彼此干擾。
毒性極低
Calcein-AM為活細(xì)胞染料，毒性極低，常規(guī)工作濃度對(duì)細(xì)胞增殖、趨化性、線粒體功能均無明顯抑制，也不影響后續(xù)轉(zhuǎn)染或流式分選。
兼容性強(qiáng)
適用于多種貼壁或懸浮細(xì)胞類型，檢測(cè)結(jié)果不會(huì)受到細(xì)胞種類的影響。
使用便捷
每次檢測(cè)僅需在清洗過細(xì)胞后將配制好的染色液加入細(xì)胞中孵育即可，隨后通過熒光顯微鏡或酶標(biāo)儀觀察結(jié)果。
應(yīng)用廣泛
可應(yīng)用于細(xì)胞增殖與毒性分析、抗癌藥物或化合物篩選、細(xì)胞凋亡與壞死研究、免疫細(xì)胞活性檢測(cè)等多種實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景。
檢測(cè)效果
對(duì)A375膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行Calcein-AM/PI活死染色（Calcein-AM=2μM，PI=4.5μM），染色時(shí)間15min，結(jié)果顯示活死細(xì)胞可清晰區(qū)分，merge后無重疊部分，兩種染料檢測(cè)效果良好且互不干擾。
A：Calcein-AM染色圖；B：PI染色圖；C：Merge圖
使用建議
為獲得最優(yōu)結(jié)果，建議根據(jù)細(xì)胞類型和密度優(yōu)化染料濃度及孵育時(shí)間。
Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒是一種經(jīng)過充分驗(yàn)證的細(xì)胞活力分析工具，無論是基礎(chǔ)研究還是藥物開發(fā)，均是進(jìn)行細(xì)胞活性評(píng)估的優(yōu)質(zhì)選擇。
產(chǎn)品推薦
| 產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
| 細(xì)胞活死鑒別 | C331308 |