小鼠皮下成瘤是生物醫學研究中非常經典的一個實驗，操作并不復雜，但由于實驗周期相對較長，動物模型個體差異大，遇到的問題往往也較多。今天我們就集中看下小鼠成瘤實驗中經常遇到哪些問題吧！

Q1：小鼠皮下成瘤形成的瘤體應該是什么顏色？我的小鼠形成的瘤體是白色，我看別人的好像都是紅色，這樣算是失敗了嗎？

A1：瘤體是白色還是紅色，和腫瘤細胞類型、腫瘤中含血量、腫瘤細胞代謝等因素有關。小鼠皮下成瘤形成的瘤體，顏色越紅，通常說明腫瘤血供越豐富，生長越活躍；顏色過暗，則可能提示內部有壞死；一些上皮來源的癌（如乳腺癌、肺癌的皮下轉移瘤）或細胞密度極高的腫瘤，可能呈現粉白色或肉色；而在細胞密度高且血供相對較少的區域，瘤體可能呈灰白色。因此瘤體的顏色并不能斷定成瘤失敗與否，具體還要靠進一步的檢測。

Q2：加基質膠后形成的瘤體會影響后續蛋白檢測跑WB嗎？

A2：不會?；|膠的主要成分：層粘連蛋白（約220 kD）、IV型膠原（160-190 kD）、硫酸乙酰肝素蛋白多糖（150-250 kD）和巢蛋白（約150 kD）。這些成分主要集中在大于150 kD的高分子量區域，對大多數目標蛋白（30-100 kD）無直接影響。

Q3：?我發現我用基質膠成瘤跟之前做的形態相比不太一樣，用基質膠成瘤會更圓更勻嗎？這是正常的嗎？

圖 不使用基質膠與使用基質膠成瘤結果對比（圖源：Influence of Matrigel on Single- and Multiple-Spheroid Cultures in Breast Cancer Research）

A3：使用基質膠進行皮下成瘤實驗，通常確實會導致形成的瘤體更圓、更規則、更勻稱。

這主要是由基質膠的物理和生物學特性決定的：它通過物理禁錮作用給腫瘤生長定了一個“圓形的模子”，同時又通過提供均勻的營養和血管支持，保證了腫瘤能夠勻稱地“長滿這個模子”。比如，像MDA-MB-231細胞，加有基質膠比無基質膠在形成的腫瘤球形狀上就會更圓更規則（如上圖所示）。

Q4：扎瘤之前十幾分鐘才把基質膠和細胞懸液混合，可以嗎？

A4：這是正常操作，沒有問題的?？梢蕴崆笆畮追昼姲鸦|膠和細胞懸液混合，混勻后需要放在冰上。過早混合會導致嚴重問題，基質膠在4℃左右保持液態，但在遇到37℃的體溫時會迅速聚合，形成不可逆的凝膠。建議從混合到注射完成的總時間最好控制在30分鐘以內，并且確保這段時間內混合物始終在冰上。時間越長，細胞在無營養的基質膠中存活率可能會略有下降，同時也增加了意外凝膠化的風險。

Q5：我的成瘤實驗過了一周還沒成瘤，是不是失敗了呢？通常幾天能夠成瘤呢？

A5：一般1-2周，成瘤比較快的像MC38可能僅需要1周，9-10天瘤體就可以達到100 mm³ ；成瘤慢一些的像HepG 2需要1-2周，2–3周瘤體達到100 mm³。具體時間因細胞類型、接種條件和實驗目的而異。可以再觀察一周看看，不必過于擔心。

小鼠成瘤實驗要想成功，除了適宜的實驗條件和正確的實驗操作，基質膠的選擇也至關重要。

Arcegel Matrix High Concentration，LDEV-Free基質膠（CAT#C231005），從富含胞外基質蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取，能夠模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有利于體外細胞的培養和分化。本產品為無菌制品，濃度大于18 mg/mL，由于其高濃度和快速成膠的特點，能夠迅速在實驗部位形成穩定的支架結構，為腫瘤的細胞生長提供良好的環境，特別適用于體內成瘤實驗。

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