炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease, IBD）是指原因不明的一組非特異性慢性胃腸道炎癥性疾病，DSS（葡聚糖硫酸鈉）誘導的小鼠腸炎模型是研究炎癥性腸病非常經典和廣泛使用的實驗方法。那么如何利用DSS建立小鼠腸炎模型呢？今天我們就來學習下。

為什么用DSS造模

葡聚糖硫酸鈉鹽（Dextran Sulfate Sodium Salt, DSS）是一種聚陰離子衍生物，其誘導結腸炎模型的機制通常認為與巨噬細胞功能失調、腸道菌群失調等有關。當動物飲用含有DSS的水溶液后，腸道黏膜屏障會被破壞，使得腸道黏膜通透性增加，原本被阻隔的細菌、內毒素等得以穿過受損的黏膜屏障，激活機體的免疫系統，引發腸道炎癥反應，進而模擬炎癥性腸病的病理特征。

實驗操作步驟（以急性模型為例）

1.動物準備

品系選擇：C57BL/6和BALb/c是最常用的品系。
年齡與性別：通常選擇6-8周齡的健康雄性小鼠。每組至少6-8只，以減少個體差異。
適應性飼養：在實驗前，將小鼠在SPF級動物房適應環境至少3-7天。

2.DSS溶液配制與給藥

配制：準確稱取DSS粉末（分子量36,000-50,000Da為佳）適量，溶于高壓滅菌水或純凈飲用水中，攪拌至完全溶解。建議現用現配，每1-2天更換一次新鮮溶液。
濃度：根據品系和模型類型選擇。例如，C57BL/6小鼠對DSS較敏感，常用2-3%；BALb/c小鼠可能需稍高濃度（如2.5-3.5%）。
給藥：將DSS溶液作為小鼠唯一的飲用水來源。確保水瓶出水順暢，每天記錄飲水量。

3.日常觀察與疾病活動指數（DAI）評分
從給予DSS當天起（記為第0天），每天同一時間觀察并記錄以下指標，進行DAI評分。DAI是體重下降、糞便性狀和便血情況的綜合評分，可以參考下表進行每日評估（評分體重下降百分比和糞便性狀及便血情況）：

表 DAI指數評分表

DAI=（體重下降分數+糞便性狀分數+便血分數）/3

通常，DAI分數顯著升高表明建模成功。

模型評估與樣本采集

在實驗終點進行以下分析：

1.結腸形態觀察
結腸長度：處死小鼠后，完整分離結腸（從盲腸到直腸）。結腸縮短是炎癥的一個典型宏觀指標。測量并記錄各組平均長度。
結腸外觀：觀察是否有充血、水腫、壁增厚等情況。

2.組織病理學分析（金標準）
樣本固定：將結腸內容物用預冷的PBS輕輕沖洗干凈后，可縱向或橫向卷成“瑞士卷”，或用福爾馬林固定。
H&E染色：通過石蠟切片和H&E染色，在顯微鏡下觀察炎性細胞浸潤、隱窩結構破壞、杯狀細胞丟失、潰瘍形成等病理變化。
組織學評分：根據炎癥嚴重程度和浸潤深度進行半定量評分。

3.其他分子生物學檢測
髓過氧化物酶（MPO）活性：反映中性粒細胞浸潤的程度。
炎癥因子檢測：通過ELISA或qPCR檢測結腸組織或血清中的炎癥因子（如TNF-α，IL-6，IL-1β）水平。

腸道通透性檢測：在處死前灌胃FITC-葡聚糖，一段時間后采集血清檢測熒光強度，評估腸屏障功能。

圖 DSS誘導的小鼠腸道炎癥（A：結腸圖片；B.結腸的內窺鏡檢查；C. H&E染色的結腸切片；

箭頭指示：1. 縮短和出血的結腸；2. 脾臟腫大；3. 淺表性炎癥；4. DSS處理小鼠的上皮侵蝕和免疫細胞浸潤）

常見問題

1.DSS的批次、分子量以及小鼠的品系、周齡和飼養環境都會顯著影響結果。不同批次的DSS效果可能有差異，建議先進行預實驗。

2.死亡率過高：說明DSS濃度對于該品系小鼠過高。對策：適當降低DSS濃度（如從3%降至2.5%）。

3.癥狀不明顯或無：可能是DSS濃度過低、小鼠品系耐受或飲水不足。對策：適當提高DSS濃度；確保水瓶暢通；檢查小鼠是否真的飲用了DSS水。

4.組內個體差異大：可能由于籠養密度過高、飲水不均導致。對策：降低籠養密度（每籠不超過5只，建議2-3只），并每天檢查水瓶。

成功構建DSS模型的關鍵在于細節控制，選擇合適品系和周齡的小鼠，精確配制和給予DSS溶液，并進行嚴謹的日常觀察和終點評估。建議在開始正式實驗前，先用少量動物進行預實驗，以確定最適合的具體DSS濃度。

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