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細胞培養那點事兒

作者:山東維真生物科技有限公司 2018-12-26T10:26 (訪問量:12026)

一、細胞培養的概念

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細胞培養技術也叫細胞克隆技術,是指將活體組織或細胞從試驗動物體內取出,放在模擬體內生存環境的體外環境中(無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養條件),使其生長繁殖,并維持其結構和功能的一種培養技術。細胞培養技術在生物、醫學研究等領域都有著廣泛的應用。

二、體外培養細胞的分型

機體取出的組織細胞的首次培養稱為原代培養,一般持續1-4周;原代培養形成的單層細胞匯合以后,需要進行分離培養,此過程稱為傳代培養。

貼附型細胞主要分為以下幾個類型:成纖維細胞型;上皮型細胞;游走細胞型;多型細胞型。懸浮型的則見于少數特殊的細胞,如某些類型的癌細胞及白血病細胞等。

三、細胞培養的條件

在細胞培養過程中,應根據離體細胞的特點和培養條件,提供滿足其生長和發育的一些基本生理條件:

1、必須保證在無菌條件下進行。細胞感染微生物后,會因被奪營養物質而導致細胞生長緩慢或停滯,甚至死亡。

2、需要提供適宜的溫度和CO2濃度。一般哺乳動物細胞培養的溫度控制在37℃,魚類的溫度要低一些。溫度過高或過低,均不利于細胞生長甚至會導致細胞死亡。在細胞培養過程中需要提供一定量的氣體(O2CO2)。CO2具有調節pH和緩沖的作用,一般提供5% CO2。

3、細胞離體培養技術的關鍵是細胞培養基。細胞培養基中需含有細胞增殖、生長所需要的各種營養物質,如提供能量的物質(N源、C源)、代謝調節控制的物質(無機鹽、維生素、激素)。理想的細胞培養液可以同時滿足細胞離體培養所需要的pH、滲透壓、營養物質、調節物質等的全部需要。動物細胞適宜pH一般控制在7.2~7.4,在此范圍細胞生長活躍,增殖速度快,如果PH過低或過高,細胞將因為細胞膜受損而死亡。

四、細胞培養的一般過程

1、準備工作 準備工作對開展細胞培養異常重要,工作量也較大,應給予足夠的重視,準備工作中某一環節的疏忽均可導致細胞培養的失敗。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試等

2、取材 在無菌環境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養器皿中,這一過程稱為取材(如是細胞株的擴大培養則無取材這一過程)。

3、培養 將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。細胞培養,一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數,按要求以一定的量(以每毫升細胞數表示,由所養細胞決定具體量)接入培養器皿并直接加入培養基。細胞進入培養器皿后,立即放入恒溫培養箱中,正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次,觀察細胞是否生長良好,形態是否正常,有無污染,培養基的PH是否正常(由酚紅指示劑指示),此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。

注意:培養細胞的密度要根據細胞的特性及傳代的時間等來定,無論傳代與否,培養基好不要超過2天就要更換一次。

4、凍存及復蘇 為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養基,以一定的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。凍存過程如下:


復蘇一般采用快融方法,即從液氮中

取出凍存管后,立即放入37℃水浴鍋中,使之在一分鐘內迅速融解,然后將細胞轉入培養器皿中進行培養。復蘇過程如下:

注:凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

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