肝臟是較早被用于基因治療的器官，現已明確許多肝病是由單基因缺陷引起，因此相比其他由多基因缺陷引起的復雜疾病更適合開展臨床基因治療。肝靶向基因治療面臨的挑戰在于肝細胞的有效靶向、載體基因組的穩定性和持續的高水平表達等，rAAV載體的出現及使用使這一難題的解決成為可能。今天小V就帶大家一起學習一下rAAV在肝臟應用中的相關選擇策略。
Vol.1 AAV血清型的選擇 在肝臟中應用較多的有AAV2、AAV5、AAV8、AAV9及AAV-DJ等血清型，研究表明AAV8、AAV9和AAV-DJ對肝臟均具有較強的親嗜性，其中AAV8嗜肝性更強，用于活體動物注射表現為免疫原性低，感染效率高，AAV-DJ的體內肝細胞轉導效率與AAV8相近，且在體外實驗中也能表現出較強的感染效率。 研究者可根據實驗目的及動物模型的不同選擇合適的血清型，其中AAV7、AAV8對小鼠肝臟感染具有較好效果；而在人體肝臟中AAV2、AAV5和AAV8親和性較強。 如下圖所示：無論是選用門靜脈還是尾靜脈注射，AAV8均能有較高的肝臟轉導水平。 Vol.2 啟動子的選擇
|
啟動子 |
啟動子 |
大小 |
|
廣譜啟動子 |
CMV（常用） |
600bp |
|
CAG |
944bp |
|
|
特異性啟動子 |
ALB（較大） |
2.4Kb |
|
TBG（常用） |
460bp |
|
|
ApoEHCR-hAAT |
1.3Kb |
圖2. 與CMV相比，TBG啟動子的肝臟特異性更強
(A) Mice received AAV9.CMV.EGFP.T2A.Luc. (B) Mice were injected with AAV9.TBG.EGFP.T2A.Luc.
（Chen SJ et al . Hum Gene Ther Methods. 2013）
Vol.3 常用的肝臟注射方式
肝臟對全身應用AAV有較高的親合性，AAV在肝臟中的注射方式分為直接傳送和外周傳送兩種（下表所示），其中尾靜脈注射和腹腔注射是目前應用比較廣泛的注射方式，操作者可根據實驗目的選擇合適的注射方式。