在細胞生物學研究中，準確評估細胞活力是了解細胞增殖、代謝狀態以及藥物作用效果的關鍵環節。細胞活力檢測方法眾多，其中CCK-8和MTT是兩種廣泛應用的比色法檢測手段。它們通過檢測細胞代謝活性來反映細胞的生存狀態，那么，我們究竟該如何選擇呢？下文將對這兩種檢測方法作出比較。

原理PK
CCK-8：是WST-8在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下被線粒體內的脫氫酶還原成水溶性的橙黃色甲臜產物（formazan）。通過酶標儀測量細胞液的OD值便可檢測出待測細胞樣品的活性。

CCK-8細胞活性檢測原理圖

MTT: 是利用活細胞的線粒體脫氫酶在代謝過程中將黃色的可溶性四唑鹽MTT還原為不溶于水的藍紫色產物-甲臜(Formazan)晶體。使用合適的溶解液如DM SO溶解沉積在細胞中的甲臜晶體，通過酶標儀測量細胞液的OD值便可檢測出待測細胞樣品的活性。

MTT胞活性檢測原理圖

操作流程PK

CCK-8和MTT操作流程圖

使用MTT法進行活力檢測時，生成的甲臜產物需要用DMSO溶解，顆粒不完全溶解或者在吸取上清操作過程中帶走部分細胞等情況，往往會導致實驗結果穩定性查、重復性差等一系列問題，有的期刊可能質疑數據的正確性。

CCK-8生成的甲臜產物是水溶性的，可直接測定OD值，不存在不完全溶解和產物被帶走的情況，可以完全避免MTT法在操作上帶來的誤差。

靈敏度PK

CCK-8使用的WST-8染料被還原后生成水溶性橙黃色甲臜，其線性范圍更寬，可檢測更低細胞密度（如100個細胞/孔），尤其適合低細胞數實驗。

MTT生成的非水溶性藍紫色甲臜需DMSO溶解，部分結晶可能丟失，導致信號減弱，靈敏度相對較低。

細胞毒性PK

CCK-8：細胞毒性較低，對細胞的生理狀態影響較小，適合長時間培養和連續監測。

MTT：可能對細胞產生一定的毒性，尤其是在長時間培養或高濃度使用時，可能影響細胞的正常生長和代謝。

綜上所述，CCK8檢測法靈敏度高、檢測快速以及操作簡便，且細胞毒性較低，是更優的選擇。

附：CCK8細胞活力檢測的經驗

1.起始細胞接種數量：以使用標準96孔板為例，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養基)。如果檢測白細胞，靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養基)。

2.CCK-8加入劑量：一般建議為按培養體系的10%添加，添加過程中應避免產生氣泡。

3.細胞孵育時間：孵育時間一般為1-4小時，一般懸浮細胞孵育的時間要長于貼壁細胞，由于CCK-8的OD值處在1.0左右是比較好的檢測結果，建議實驗者可以每隔0.5h測定一次OD值，以摸索出最佳孵育時間。

4.檢測波長：如果沒有450 nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測靈敏度高。

5.CCK-8對細胞的毒性：CCK-8毒性非常低，檢測完后相同的細胞可以繼續進行其它細胞增殖檢測，如結晶紫染色法、中性紅染色法或DNA熒光染色法等。

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