在真核細胞（哺乳動物細胞）和原核細胞（細菌）中，細胞增殖與細胞死亡之間的平衡對于維持細胞的有機發育和生命至關重要。失衡可能導致各種疾病?；罴毎退兰毎臓顟B是研究生物增殖和生長時的常見研究重點。例如，在真核細胞中，通過特定儀器分析細胞膜的完整性和細胞內酯酶活性來確定細胞狀態，為研究細胞狀態和分析活細胞與死細胞以評估細胞活力提供了方便的方法。它可應用于大多數真核哺乳動物細胞，但不適合真菌和酵母。主要用于藥物研究、毒性測定和細胞生長狀態研究。

Arcegen Biology精心開發了一種適用于真核細胞和原核細胞的雙重染色檢測試劑盒，以滿足您的研究需求。

檢測原理

1. 細胞染色

Calcein-AM是一種常用的活細胞熒光染色試劑，它在被細胞攝取后，由細胞內的酯酶催化去乙酰化，形成帶負電荷的Calcein，該分子不能透過細胞膜，因此會在細胞內累積并發出強綠色熒光（激發波長約為490納米，發射波長約為515納米）。Calcein-AM本身是非熒光的，只有在細胞內經過酯酶作用后才會發光，因此它非常適合用于活細胞的標記，且細胞毒性極低。

由于死細胞缺乏酯酶活性，Calcein-AM主要用于活細胞的短期標記和細胞活性測試。因此，Calcein-AM常與能夠染色死細胞的熒光染料如碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）聯合使用，以實現活細胞和死細胞的同時熒光雙重染色。PI能夠穿過死細胞膜的無序區域，與DNA結合后發出紅色熒光（激發波長約為535納米，發射波長約為617納米），因此可以用于死細胞的染色。

這種雙重染色方法使得研究人員能夠在熒光顯微鏡下同時觀察活細胞（綠色熒光）和死細胞（紅色熒光），從而評估細胞的生存狀態。這種染色方法適用于大多數真核細胞，包括貼壁細胞和某些組織樣本，但不包括細菌和酵母樣本。Calcein-AM和PI的雙重染色方法廣泛應用于藥物研究、毒性測定和細胞生長狀態研究等領域。
 

2. 細菌染色

熒光染料DMAO是一種綠色的核酸熒光染料，能夠染色活細菌和死細菌。EthD-III是一種紅色的核酸熒光染料，只能染色那些細胞膜受損的死細菌。當DMAO和EthD-III混合使用進行染色時，具有完整細胞膜的細菌會呈現綠色，而細胞膜受損的細菌則會同時呈現綠色和紅色。這些結果可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行分析，并且適用于大多數類型的細菌。

應用檢測

1. 細胞染色結果

注意：細胞類型 = A375黑色素瘤細胞，Calcein-AM = 2 μM，PI = 4.5 μM，染色時間 = 15分鐘

A是Calcein-AM染色圖像，B是PI染色圖像，C是合并圖像。
 

2. 細菌染色結果

注意：細胞類型 = 大腸桿菌，EthD-III = 2 μl，DMAO = 4 μl，染色時間 = 15分鐘。

A是EthD-III染色圖像，B是DMAO染色圖像，C是合并圖像。
 

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