乳腺癌（BC）是全球女性中最常見的惡性腫瘤。為了設計新的個性化治療方法，全面理解正常乳腺發育、癌變和疾病進展的潛在過程是必要的。然而，缺乏合適且廣泛可用的體外模型阻礙了這一進程。

類器官是體外培養的三維細胞結構，模擬體內器官的細胞結構，能夠更準確地保留體內細胞的生物學特性和功能。乳腺類器官能夠準確復制體內乳腺微環境，并已被用于檢查影響信號通路、基因表達和組織重塑的因素。

乳腺類器官培養方案

我們根據Clevers H發表的兩篇文章[1][2]匯編了一份從乳腺組織中生成乳腺類器官的培養方案。這個模型可以用于正常人類乳腺組織或乳腺癌組織衍生的類器官的長期培養。

圖 乳腺癌組織分化為乳腺類器官的過程（PMID: 33692550）[2]

1、從乳腺組織切除物中分離上皮細胞

1.1 將每個組織樣本（<3-4 cm³）轉移到含有D-BSA（DMEM GlutaMAX培養基中加入終濃度0.1%不含脂肪酸的BSA）的50 mL Falcon試管中，用手術刀將組織切成0.5-1 mm³的小塊（組織塊應均勻且略顯粘稠）。

1.2 用D-BSA洗滌組織碎片幾次，讓其沉淀，然后去除上清液。

1.3 加入Type I培養基，充分混勻，然后加入終濃度1 mg/mL的Type II膠原酶和10 μM Y-27632，在37°C下消化1-2小時。

1.4 通過加入FBS終止消化，過濾通過100 μm濾網，450 g離心5分鐘以去除上清液。

1.5 如果沉淀物呈紅色，加入紅細胞裂解緩沖液，室溫孵育2分鐘，然后加入D-BSA，450 g離心5分鐘以去除上清液。

2、類器官培養

2.1 在BME（基底膜提取物，或用Matrigel替代）中重懸細胞沉淀，充分混合后，逐滴滴加到12孔板中。倒置并在37°C下固化。

圖 12孔板中BME滴液的代表性圖像（PMID：33692550）[2]

2.2 添加適量的Type I培養基（Advanced DMEM/F12, 10% R-spondin1-conditioned medium, 10% Noggin-conditioned medium, 1× B27+VitA, 10 mM Nicotinamide, 1.25 mM N-acetyl-L-cysteine, 100 μg/mL Primocin, 5 μM Y-27632, 5 nM Heregulin B1, 5 ng/mL FGF-7, 20 ng/mL FGF-10, 0.5 μM A83-01, 5 ng/mL EGF, 1 μM SB202190) or Type II medium (Advanced DMEM/F12, 20% Wnt3a-conditioned medium, 10% R-spondin1-conditioned medium, 10% Noggin-conditioned medium, 1× B27+VitA, 10 mM Nicotinamide, 1.25 mM N-acetyl-L-cysteine, 0.5 μg/mL Hydrocortisone, 100 nM β-estradiol, 10 μM Forskolin, 100 μg/mL Primocin, 5 μM Y-27632, 5 nM Heregulin B1, 20 ng/mL FGF-10, 0.5 μM A83-01, 5 ng/mL EGF）并在37°C、5% CO2的培養箱中繼續培養。每2-4天更換一次培養基。7-21天后對類器官進行傳代。

圖 使用Type I或Type II培養基獲得的乳腺類器官明場圖像（PMID：33692550）[2]

圖 乳腺類器官代表性明場圖像，太稀疏（左）、太密集（中）或密度適中（右）（PMID：33692550）[2]

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