支原體污染對細胞培養造成各種有害影響，成為細胞培養過程中的一個重要問題。保守估計，常規細胞培養中的污染率在15%到35%之間，大大降低了實驗結果的可信度。因此，定期檢測和根除支原體對于確保細胞培養系統中不存在支原體并獲得準確可靠的實驗數據至關重要。經過多次實驗驗證，Arcegen推出了一種全面的支原體清除解決方案。

支原體是什么？

支原體(Mycoplasma)，迄今發現的最小和最簡單的原核生物，直徑為0.1-0.3 μm。它們可以很容易地通過過濾器并污染培養系統，表現出高度的多形性，具有多種形式，如球形、桿狀、絲狀和分支狀。

Figure 1. Morphology and Characteristics of Mycoplasma

支原體污染的后果

由細菌和真菌引起的污染相對容易檢測、預防和清除。然而，由支原體引起的污染難以檢測；即使當生長密度達到10⁷-10⁹ CFU/毫升時，通常也沒有可見的污染跡象(如濁度、pH值變化等)。).

Figure 2. Changes in Cellular States Associated with Mycoplasma Contamination

支原體污染的來源

1.細胞間的交叉污染。

2.工作環境或實驗室設備的污染。

3.實驗者的無菌技術差。

4.培養基或其他試劑的污染。

5.用于細胞制備的原始組織或器官的污染。

細胞培養出現支原體污染怎么辦？

Figure 3. Comprehensive Solution for Mycoplasma Contamination

細胞培養中支原體污染的解決方案

1. 支原體檢測

1）One-step Isothermal Mycoplasma Detection一步法恒溫支原體檢測

Arcegen的一步等溫支原體檢測試劑盒利用獨特的等溫擴增技術，具有更強的顏色辨別能力，從藍紫色(陰性)過渡到天藍色(陽性)，便于視覺識別。它包括額外的防污染組件，以消除假陽性結果。

Figure 4. Workflow of One-step Mycoplasma Detection Procedure

2）PCR技術的支原體檢測

Arcegen基于PCR的支原體檢測方法與傳統的一步PCR檢測方法不同，它將引物對的數量從1個增加到3個，目標是支原體16S和23S rRNA的保守區域。這種巢式PCR擴增提高了靈敏度，同時減少了非特異性擴增，允許以低至單個拷貝的水平檢測支原體。

Figure 5. Gel Electrophoresis Image of PCR Amplification with Mycoplasma Samples of Different Concentrations

Table1. Types of Mycoplasma Detectable by Arcegen One-Step Isothermal Mycoplasma Detection Kit

[Note]The blue portion indicates the same mycoplasma species detectable by both the one-step isothermal detection and PCR detection methods.

2. DfCell Mycoplasma Removal Reagent (1000×) DfCell支原體去除試劑

DfCell支原體清除試劑(1000×)是一種混合制劑，通過抑制DNA和支原體生長所需蛋白質的合成來實現有效的支原體清除，而不會對細胞造成傷害。它旨在最大程度地拯救您的細胞，并將支原體污染造成的損失降至最低。

Figure 6. Demonstration of Cell Removal Effectiveness

• 支原體去除試劑產品優勢：

低毒性：對細胞的毒性最小，不影響隨后的細胞實驗，如細胞活力測定和細胞轉染。

穩定性強：試劑可在-20°C下長時間儲存，同時保持高效。

操作簡單：只需將產品加入被支原體污染的培養基中，孵育即可。

快速作用：“立即生效”，在短短3天內就能看到效果。

去除范圍廣：能夠去除實驗室常見的大多數支原體類型。

Figure 7. Illustration of Cell Toxicity Detection of DfCell Mycoplasma Removal Reagent

3.預防支原體污染

常見問題

問:如何檢測新鮮培養基是否被支原體污染？

答:將新鮮培養基在CO2培養箱中培養48小時(樣本)，然后收集一定量的上清液用于測試。如果樣本變成天藍色或顯示PCR擴增帶，則表明支原體污染。

問:為什么同一樣本在一步恒溫檢測試劑盒中結果顯示為陽性，而在PCR檢測中卻為陰性？

答:一步恒溫檢測試劑盒檢測27種支原體，而PCR檢測只檢測12種常見類型。樣本中的支原體污染可能不包括在PCR檢測的種類中。

問:為什么對于同一份樣本，PCR結果顯示為陽性，而一步恒溫檢測試劑盒結果為陰性？

答:PCR的靈敏度高于一步恒溫法，因為它可以檢測單個拷貝的支原體，而一步法需要10³個拷貝。

問:巢式PCR和一步恒溫檢測試劑盒哪個更好？

答:客戶可以根據他們的實驗需求選擇合適的產品，或者他們可以結合使用這兩種方法來識別支原體污染。

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