慢病毒包裝是指在體外生產出有感染能力但無復制能力的慢病毒顆粒的過程。最終得到的病毒顆?？梢愿腥灸繕思毎?，并將目的基因整合到細胞的基因組中，實現長期、穩定的表達。但慢病毒包裝實驗常常出現許多問題影響最終效果，今天我們就來看看如何解決這些問題。
01 感染效率不足
熒光標記<30%，qPCR檢測載體拷貝數低。
原因和解決方法：
a.MOI設置不當：
根據文獻或說明書提供的參考 MOI，可在其上下各設2個2倍梯度驗證即可。
b.細胞不適合用慢病毒進行感染：
慢病毒適用于大部分細胞系，例如肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞等，但也有一些細胞不適合用慢病毒感染，可能更適合用腺病毒，可查閱文獻確定。
c.細胞本身較難感染：
懸浮細胞可使用平角離心轉染法，其他一些較難感染的細胞可進行二次感染法感染。
02 細胞死亡明顯
感染24 h內出現大量漂浮細胞，細胞死亡明顯。
原因和解決方法：
a.MOI（感染復數）過高:
需要摸索尋找最適合的MOI，降低MOI值。
b.病毒上清本身毒性較大：
縮短轉染時間至，隨后換液。
c. 細胞本身較為敏感：
更換其它細胞進行嘗試。
03 病毒滴度低
qPCR或ELISA測得的病毒滴度顯著低于預期。
原因和解決方法：
a.轉染效率低：
檢查293T/293FT細胞代數（<P20）與融合度（70-80%）。
換用PEI、Lipofectamine 3000等轉染效果較好的轉染試劑；優化DNA和轉染試劑比例。
b.質粒質量差：
A260/A280 < 1.8或鹽離子過高會抑制慢病毒包裝，可重新中提或大提質粒。
c.包裝質粒比例失衡:
優化不同質粒包裝系統的質粒比例，可參考需要根據具體使用的質粒組合和實驗條件進行優化?？梢詮奈墨I或產品推薦的比例范圍進行摸索。
04 病毒滴度不穩定
同批病毒凍存一段時間后滴度下降。
原因和解決方法：
a. 反復凍融：
首次收獲后即用0.22μm濾器分裝為50-100μL小管，一次性使用。
b. 操作條件不一致：
盡量選取狀態相同的細胞進行操作，實驗條件每次嚴格一致。
產品推薦
| 中文名稱 | 英文名稱 | 產品貨號 |
| 慢病毒包裝試劑盒 | Lentiviral Packaging Kit | C230129 |