在細(xì)胞凋亡的晚期階段，染色體DNA會(huì)發(fā)生雙鏈或單鏈斷裂，導(dǎo)致形成許多粘性的3'-OH末端。這些末端可以在末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，用熒光或酶標(biāo)記的dUTP進(jìn)行標(biāo)記。這使得凋亡細(xì)胞的檢測(cè)成為可能，這種方法被稱為TUNEL檢測(cè)法。由于正常或增殖的細(xì)胞很少發(fā)生DNA斷裂，因此形成的3'-OH末端很少，它們很少被染色。目前，Arcegen提供一種適用于晚期凋亡檢測(cè)的TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。
圖5. TUNEL實(shí)驗(yàn)的原理
1. TUNEL探針可以檢測(cè)不同類型的樣本，包括石蠟包埋組織切片、冷凍組織切片、培養(yǎng)細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞。
帶有不同熒光顏色的TUNEL檢測(cè)試劑盒可以對(duì)不同的樣本進(jìn)行標(biāo)記，如細(xì)胞、細(xì)胞涂片、石蠟切片等，并發(fā)出不同的熒光信號(hào)。
圖6a. TUNEL-FITC檢測(cè)細(xì)胞樣本，來(lái)源：參考文獻(xiàn)
圖6b. TUNEL-Alexa488檢測(cè)石蠟切片，來(lái)源：參考文獻(xiàn)
圖6c. TUNEL-Alexa640檢測(cè)細(xì)胞涂片，來(lái)源：參考文獻(xiàn)
2. 高選擇性和靈敏度地針對(duì)晚期凋亡中的特定DNA片段
在納摩爾濃度水平下，TUNEL探針選擇性地靶向并標(biāo)記晚期凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的粘性3'-OH末端，發(fā)出強(qiáng)烈的熒光信號(hào)，從而能夠檢測(cè)到極少量的凋亡細(xì)胞。
3. 檢測(cè)的多樣性
熒光信號(hào)可以通過(guò)多種儀器檢測(cè)，包括流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）讀數(shù)器。
圖7. 不同儀器測(cè)量TUNEL熒光信號(hào)值
4. 低背景干擾和強(qiáng)穩(wěn)定性
沒(méi)有來(lái)自其他熒光顏色的背景干擾，使得染色清晰。此外，不同批次之間的性能保持穩(wěn)定。