在細胞凋亡的晚期階段,染色體DNA會發生雙鏈或單鏈斷裂,導致形成許多粘性的3'-OH末端。這些末端可以在末端脫氧核糖核酸轉移酶(TdT)的作用下,用熒光或酶標記的dUTP進行標記。這使得凋亡細胞的檢測成為可能,這種方法被稱為TUNEL檢測法。由于正?;蛟鲋车募毎苌侔l生DNA斷裂,因此形成的3'-OH末端很少,它們很少被染色。目前,Arcegen提供一種適用于晚期凋亡檢測的TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒。

圖5. TUNEL實驗的原理
1. TUNEL探針可以檢測不同類型的樣本,包括石蠟包埋組織切片、冷凍組織切片、培養細胞和從組織中分離的細胞。
帶有不同熒光顏色的TUNEL檢測試劑盒可以對不同的樣本進行標記,如細胞、細胞涂片、石蠟切片等,并發出不同的熒光信號。

圖6a. TUNEL-FITC檢測細胞樣本,來源:參考文獻

圖6b. TUNEL-Alexa488檢測石蠟切片,來源:參考文獻

圖6c. TUNEL-Alexa640檢測細胞涂片,來源:參考文獻
2. 高選擇性和靈敏度地針對晚期凋亡中的特定DNA片段
在納摩爾濃度水平下,TUNEL探針選擇性地靶向并標記晚期凋亡細胞中斷裂DNA的粘性3'-OH末端,發出強烈的熒光信號,從而能夠檢測到極少量的凋亡細胞。
3. 檢測的多樣性
熒光信號可以通過多種儀器檢測,包括流式細胞儀、熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡和酶聯免疫吸附測定(ELISA)讀數器。

圖7. 不同儀器測量TUNEL熒光信號值
4. 低背景干擾和強穩定性
沒有來自其他熒光顏色的背景干擾,使得染色清晰。此外,不同批次之間的性能保持穩定。
