在細胞功能實驗中，檢測細胞增殖、毒性和活性至關重要。目前，常用的細胞增殖和活性檢測試劑通?；诩毎麅染€粒體脫氫酶的還原能力，如MTT法、XTT法、WST-1法、CCK法等。

Arcegen Biology推出了基于WST-8的細胞活性檢測試劑盒——即細胞計數試劑盒（簡稱CCK試劑盒），與MTT相比具有更低的細胞毒性，檢測更靈敏，操作更簡便。
 

實驗原理

WST-8 (2-(2-Methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt)可以被線粒體中的脫氫酶還原，在電子耦合試劑1-甲氧基PMS的存在下形成高度水溶性的橙黃色甲酰胺。顏色強度與細胞增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在450納米波長下測量吸光度值（OD值），間接反映活細胞的數量。

表1. CCK法與其他細胞增殖/毒性檢測方法的優勢比較

產品特點

易用性：產品為液體，開瓶即用；甲酰胺可溶于水，無需用有機溶劑溶解。
高靈敏度：寬廣的線性范圍，高靈敏度，良好的重復性。
低細胞毒性：細胞毒性極低，不影響后續實驗。
良好的穩定性：培養基中含酚紅和血清不影響檢測結果。
廣泛的適用性：適用于大規模、高通量的樣本測試。

應用領域

細胞增殖實驗、細胞毒性實驗、藥物篩選、腫瘤藥物敏感性測試、生物因子活性檢測等。

產品數據

與類似產品的性能比較

細胞類型：293T人胚腎細胞；

培養基：含10% FBS的高糖DMEM培養基；

孵育時間：3小時；細胞數量：1000。
 

參考已發表的文獻數據

常見問題解答

Q1: CCK的儲存和穩定性如何？

A1: CCK具有高穩定性。在避光條件下，-20°C下有效期為2年，4°C下有效期為1年。對于頻繁使用的情況，建議在4°C下儲存，以避免反復凍融。CCK通常呈粉紅色，顏色的顯著變化可能表明質量發生了變化。

Q2: CCK的細胞毒性如何？

A2：CCK的毒性非常低，這允許在CCK檢測之后使用相同的細胞進行其他細胞增殖測試，例如結晶紫染色、中性紅染色或DNA熒光染色。

Q3: CCK會染色活細胞嗎？

A3: 不會，WST-8不會進入細胞內部進行染色。整個顏色發展反應都發生在培養體系中。此外，WST和WST-8形成的甲酰胺都是高度水溶性的，反應結束后更換新鮮培養基可以去除外來成分。

Q4: 進行細胞活性檢測時，每個孔應該接種多少細胞？

A4：當使用標準的96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為每個孔1000個細胞（100 μL培養基）。對于白細胞的檢測靈敏度相對較低，因此建議每個孔至少接種2500個細胞（100 μL培養基）。

Q5: 對于使用6孔或24孔板的實驗，CCK試劑的用量是多少？

A5：對于使用6孔或24孔板的實驗，根據每孔所需的接種體積計算，并添加占每孔培養基總體積10%的CCK溶液。

Q6: 培養基中的背景顏色，如酚紅，會影響細胞活性檢測嗎？

A6：不會，計算時可以減去培養基中酚紅的吸光度，從而消除其對檢測的影響。

Q7: 384孔板能否用于細胞增殖和活性檢測實驗？

A7: 是的，CCK-8產品的用量是每孔培養基總體積的10%。建議先將CCK-8產品稀釋一倍，然后添加到每孔培養基總體積的20%，以減少誤差。

Q8: 是否只能在450納米波長下測量OD值？

A8：OD值可以在450納米波長下測量，但如果沒有這個波長的濾光片，可以選擇430-490納米之間的吸收濾光片。不過，450納米的濾光片能提供更高的靈敏度。

Q9: 如果暫時不測量OD值應該怎么辦？

A9：如果暫時不測量OD值，可以在每個孔中加入10 μL的0.1 M鹽酸溶液或1% w/v的SDS溶液，然后將培養板覆蓋并儲存在室溫避光處。在24小時內測量不會導致吸光度發生變化。

Q10: 添加CCK-8時可以不更換培養基嗎？

A10：通常，在添加CCK-8時不需要更換培養基。但是，如果培養基中含有氧化還原物質，可能會出現誤差，這時必須使用其他培養基。

Q11: 實驗中遇到高OD值應該怎么處理？

A11: 你可以減少加入CCK-8后的孵育時間。例如，你可以將加入CCK-8試劑后的孵育時間從2小時縮短到1小時。此外，你也可以適當減少細胞數量。

Q12: 實驗中遇到低OD值應該怎么處理？

A12: 可以使用兩種方法：1. 適當增加細胞數量。2. 延長加入CCK-8試劑后的反應時間。

Q13: 每次實驗都需要做標準曲線嗎？

A13: 建議這樣做。盡管使用的細胞是相同的，但它們的狀態可能會有所不同。對于狀態不同的細胞，建議每次都創建一個標準曲線。

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