眾所周知，骨質疏松癥（OP）是一種以骨量減少、骨的微觀結構退化和骨折危險系數增高為特征的系統性骨代謝疾病，已日益成為威脅中老年人生活質量的常見病。斑馬魚作為一種小型脊椎類模式生物，由于其具有胚胎透明、骨骼發育迅速、與人類高達87%的基因同源性等特點，而被廣泛應用于骨骼發育及相關疾病研究。目前已有研究表明，淫羊藿對骨代謝、免疫系統、抗腫瘤等均有作用。炙淫羊藿即用羊油炒過的淫羊藿，其抗骨質疏松活性受到廣泛關注。

11月1日，由廣東省檢測檢驗學會提出并歸口，廣東省中藥研究所、廣東省人民醫院、深圳大學、廣州環特、廣東金駿康生物科技有限公司等科研院所、企業聯合起草的團體標準——《炙淫羊藿抗骨質疏松活性的測定 斑馬魚法》（標準編號：T/GSTI 0006—2024）正式發布，并將于12月1日起正式實施。

這是全國首個基于斑馬魚測定炙淫羊藿抗骨質疏松活性的標準。該標準規定了炙淫羊藿抗骨質疏松活性的斑馬魚測定方法，斑馬魚檢測標準的制定和實施為中藥高通量動物模型的抗骨質疏松方法的建立、骨質疏松病理機制的研究，提供了參考和依據，填補該領域檢測標準的空白，將對中藥篩選及創新型研究起到引領、支撐、規范作用，對促進中醫藥行業高質量發展有著重要的意義。

01、標準技術評審會

9月5日，廣東省檢驗檢測學會組織召開了2024年團體標準技術評審會，對《炙淫羊藿抗骨質疏松活性的測定 斑馬魚法》等團體標準進行技術審查。

會議由廣東省檢驗檢測學會副會長胡文軍主持，項目專家組由廣東省科學院生物與醫學工程研究所副所長余構彬、廣東省粵科標準化科學研究有限公司標準化副所長吳巧、廣州市藥品檢驗所中藥室副主任栗建明等5人組成，余構彬任專家組組長，學會專職副秘書長洪建軍參加會議。

會上，專家組聽取了標準起草過程和技術要點等匯報，并對標準文本進行了逐條逐款審查、對每項內容和相關資料等方面進行了質詢和討論，提出了修改補充意見和建議。專家組討論決定，一致同意團體標準《炙淫羊藿抗骨質疏松活性的測定 斑馬魚法》修改后通過技術審查。

此次省學會組織評審通過的斑馬魚檢測標準的制定和實施為中藥高通量動物模型的抗骨質疏松方法的建立提供了參考和依據，填補該領域檢測標準的空白。

02、標準介紹

該標準經廣東省檢驗檢測學會專家會評審通過，規定了炙淫羊藿抗骨質疏松活性的斑馬魚測定方法，共分為范圍、規范性引用文件、術語和定義、實驗動物、結果計算、實驗有效性等9個部分，適用于小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens Maxim.、朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai干燥葉的羊脂油炮制品的抗骨質疏松活性的測定等。

該標準規定了炙淫羊藿抗骨質疏松活性的斑馬魚測試方法為：將4dpf斑馬魚置于24孔板中，分別給予相應溶液1mL，于28±1℃的培養箱中培養孵育，每24h換相應溶液50%，直至孵育至9dpf；其染色方法為：吸凈孔板中的溶液，用標準稀釋液潤洗2遍，加入1mL現配的0.2 %鈣黃綠素工作液，避光染色45min。染色后用標準稀釋液潤洗，直至溶液顏色透明。

將仔魚側身擺放，用甲基纖維素固定，置于熒光顯微鏡下對斑馬魚脊椎進行觀察并拍照。統計各組斑馬魚的染色脊椎節個數，定量分析第1～3節脊椎椎體（如圖1）的熒光強度（A），統計學處理結果以均值（mean）±標準差（SE）表示；采用單因素方差分析，p＜0.05表明具有統計學差異。

骨質疏松改善率（%）按（1）計算，計算公式如下：

式中：B ——骨質疏松改善率，單位%；Ai ——供試品組或陽性對照組的熒光強度，單位AU；A1 ——模型對照組的熒光強度，單位AU；A0 ——空白對照組的熒光強度，單位AU。

標準還規定了實驗有效性的判斷、測試要求及結果解讀等。各測試組暴露完成后，存活率至少為90%，否則測試結果無效。每批次測試的陽性對照組的脊椎節個數和熒光強度與模型對照組相比（p＜0.05），且陽性對照組斑馬魚的骨質疏松改善率為正數。供試品組斑馬魚脊椎節個數和熒光強度與模型對照組相比（p＜0.05），且骨質疏松改善率為正數的情況下，實驗結果可作為供試品具有抗骨質疏松活性的依據。

未來，環特生物作為健康美麗產業CRO服務領軍企業、斑馬魚技術應用領導者，將依托“斑馬魚+類器官+哺乳動物+人體臨床”多維生物技術服務平臺，聯合更多的合作伙伴，持續推進斑馬魚技術創新與應用，以標準化引領行業升級，助力中醫藥產業高質量發展！