嵌合抗原受體（CAR）T細(xì)胞療法在治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤方面目前已經(jīng)取得了顯著成功，但其在實(shí)體瘤治療中仍面臨三大核心障礙：腫瘤特異性抗原缺失、T細(xì)胞歸巢與浸潤(rùn)能力不足以及免疫抑制性的腫瘤微環(huán)境（TME）。為突破這些局限，科學(xué)界正積極探索多種聯(lián)合策略，其中，將CAR-T細(xì)胞療法與免疫檢查點(diǎn)抑制劑、放療或溶瘤病毒聯(lián)合使用，已被證實(shí)有改善臨床療效的潛力。
? 作為一種理想的聯(lián)合治療藥物，溶瘤病毒是一種能選擇性感染并裂解癌細(xì)胞的病毒。其作用機(jī)制不僅在于直接溶瘤，更在于能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性細(xì)胞死亡，釋放信號(hào)，從而將“冷”腫瘤轉(zhuǎn)化為免疫細(xì)胞富集的“熱”腫瘤。此外，經(jīng)過基因工程改造、可表達(dá)細(xì)胞因子或趨化因子（如CXCL9、CXCL11）的溶瘤病毒，能進(jìn)一步重塑TME，增強(qiáng)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)，與CAR-T療法產(chǎn)生強(qiáng)大的協(xié)同效應(yīng)。因此，溶瘤病毒被視為增強(qiáng)CAR-T實(shí)體瘤療法的理想輔助手段。
? 這一思路在最新研究中得到了有力印證。2025年7月發(fā)表于期刊《Journal for ImmunoTherapy of Cancer》的一項(xiàng)研究《hCCL19-expressing recombinant Newcastle disease virus boosts CAR T cell infiltration and efficacy in solid tumor》闡明，一種表達(dá)人CCL19的重組新城疫病毒（rNDV19）與CAR-T細(xì)胞的聯(lián)合療法，能通過增強(qiáng)免疫細(xì)胞浸潤(rùn)與活化，有效克服實(shí)體瘤治療瓶頸，為將“冷”腫瘤轉(zhuǎn)化為“熱”腫瘤提供了切實(shí)可行的新策略。
該研究基于新城疫病毒Italien株（iNDV）構(gòu)建了表達(dá)人CCL19的重組病毒rNDV19。該病毒保留天然溶瘤活性，并能分泌CCL19趨化因子。研究團(tuán)隊(duì)將其與多西環(huán)素誘導(dǎo)的CD147-CAR-T細(xì)胞聯(lián)用，旨在利用CCL19介導(dǎo)的趨化作用招募CCR7+ T細(xì)胞（包括中央記憶T細(xì)胞和干細(xì)胞記憶T細(xì)胞）浸潤(rùn)腫瘤。通過原位肺癌模型證實(shí)，rNDV19可通過調(diào)控腫瘤微環(huán)境增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的募集與活化，為克服實(shí)體瘤中CAR-T細(xì)胞浸潤(rùn)不足的難題提供了新型聯(lián)合治療策略。
rNDV19表達(dá)hCCL19并保持腫瘤選擇性的溶瘤特性
研究者將rNDV19經(jīng)過工程化改造，將hCCL19基因插入HN和F基因之間，并通過測(cè)序驗(yàn)證（圖1a）。為評(píng)估插入的基因是否影響病毒復(fù)制，同時(shí)比較了rNDV19感染或iNDV感染的細(xì)胞上清液中的病毒滴度。結(jié)果顯示，rNDV19的復(fù)制能力與iNDV相當(dāng)（圖1b）。
為評(píng)估rNDV19的腫瘤選擇性細(xì)胞毒性，研究者測(cè)量了NCI-H460（腫瘤細(xì)胞）、BEAS-2B（正常細(xì)胞）和來自三名健康供體的PBMCs的活力。在NCI-H460細(xì)胞中，與PBS相比，iNDV和rNDV19在感染后72小時(shí)均顯著降低細(xì)胞活力，兩種病毒之間無差異。在正常細(xì)胞（BEAS-2B和PBMCs）中，iNDV和rNDV19均不影響細(xì)胞活力（圖1c），證實(shí)rNDV19保留了與野生株相同的腫瘤選擇性細(xì)胞毒性。
圖1（a-c）.表達(dá)人CCL19的重組新城疫病毒的構(gòu)建與特性研究
rNDV19表達(dá)的hCCL19在體外吸引淋巴細(xì)胞
研究證實(shí)，rNDV19感染的腫瘤細(xì)胞能成功表達(dá)并分泌hCCL19蛋白，且其表達(dá)水平隨時(shí)間推移而增加。通過趨化遷移實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了其生物學(xué)功能，結(jié)果顯示，rNDV19產(chǎn)生的hCCL19能有效吸引免疫細(xì)胞發(fā)生遷移。機(jī)制研究表明，這一趨化作用是通過hCCL19與其受體CCR7的特異性結(jié)合所介導(dǎo)的（圖1d-f）。尤為關(guān)鍵的是，對(duì)CAR-T細(xì)胞亞群的分析顯示(圖1 f)，其中有相當(dāng)一部分細(xì)胞表達(dá)CCR7受體，這些細(xì)胞亞群通常與更好的治療預(yù)后相關(guān)。該發(fā)現(xiàn)從機(jī)制上解釋了rNDV19如何作為“增強(qiáng)劑”，利用其表達(dá)的hCCL19主動(dòng)招募CAR-T細(xì)胞向腫瘤部位浸潤(rùn)，從而有望解決CAR-T療法在實(shí)體瘤中浸潤(rùn)不足的問題。
圖1（d-f）.表達(dá)人CCL19的重組新城疫病毒的構(gòu)建與特性研究
rNDV19在體內(nèi)促進(jìn)CAR-T細(xì)胞的持續(xù)浸潤(rùn)?
為探究rNDV19能否增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的腫瘤浸潤(rùn)，研究者在原位肺癌小鼠模型中評(píng)估了不同治療策略的效果（圖2a）。結(jié)果顯示，rNDV19在腫瘤組織中的復(fù)制動(dòng)力學(xué)與親本病毒iNDV相似，并成功介導(dǎo)了hCCL19的表達(dá)，證實(shí)其兼具溶瘤與遞送趨化因子的雙重功能（圖2b, c）。
在驗(yàn)證此基礎(chǔ)后，進(jìn)一步的分析表明，與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合使用時(shí)，rNDV19治療組在后期表現(xiàn)出顯著的腫瘤面積縮小，其效果優(yōu)于其他對(duì)照組，展現(xiàn)了強(qiáng)大的抗腫瘤療效（圖2d, e）。
圖2.rNDV19在腫瘤組織中有效復(fù)制，并與CAR-T細(xì)胞協(xié)同降低腫瘤負(fù)荷
rNDV19與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合療法增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄組特征
轉(zhuǎn)錄組分析表明，rNDV19與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合治療可誘導(dǎo)獨(dú)特的抗腫瘤免疫特征。與對(duì)照組相比，聯(lián)合治療組差異表達(dá)基因數(shù)量顯著增加且呈現(xiàn)獨(dú)特轉(zhuǎn)錄譜（圖3a,b）。功能富集分析顯示該療法特異性激活T細(xì)胞活化、白細(xì)胞趨化及細(xì)胞因子產(chǎn)生等關(guān)鍵免疫通路（圖3b）。進(jìn)一步分析證實(shí)聯(lián)合治療可促進(jìn)CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞等多類免疫細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中富集（圖3c），并通過調(diào)節(jié)趨化因子信號(hào)通路增強(qiáng)免疫細(xì)胞遷移能力。這些證據(jù)共同表明rNDV19能有效激活腫瘤免疫微環(huán)境，提升CAR-T細(xì)胞治療效果。
圖3.rNDV19與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合療法增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄組特征
rNDV19與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合療法的協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)
本研究通過系統(tǒng)評(píng)估rNDV19與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合治療在原位肺癌模型中的療效，證實(shí)該聯(lián)合策略能顯著提升治療效果。研究人員將荷瘤小鼠分為六個(gè)治療組（含對(duì)照組、單藥組及聯(lián)合治療組）。生存分析顯示，聯(lián)合治療組小鼠生存期顯著延長(zhǎng)，死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯降低（圖4a, 4b）。相較于單藥治療，聯(lián)合治療組展現(xiàn)出顯著生存優(yōu)勢(shì)。通過設(shè)立CAR-T細(xì)胞失活對(duì)照組，證實(shí)療效依賴活性CAR-T細(xì)胞的特異性作用（圖4c）。生物發(fā)光成像顯示聯(lián)合治療能有效抑制腫瘤進(jìn)展（圖4d），同時(shí)減輕治療相關(guān)的體重下降等副作用（圖4e）。該研究證實(shí)rNDV19能通過協(xié)同作用增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤效能，在延長(zhǎng)生存期、控制腫瘤負(fù)荷及改善治療耐受性方面展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)，為臨床轉(zhuǎn)化提供重要依據(jù)。
圖4.rNDV19與CAR-T細(xì)胞的聯(lián)合治療顯著延長(zhǎng)了荷瘤小鼠的生存期
該研究首次證實(shí)，表達(dá)hCCL19的重組新城疫病毒（rNDV19）可通過系統(tǒng)性給藥與CAR-T細(xì)胞協(xié)同作用，顯著增強(qiáng)免疫細(xì)胞在原位肺癌模型中的浸潤(rùn)深度與活性。轉(zhuǎn)錄組分析顯示聯(lián)合治療特異性激活T細(xì)胞趨化與分化關(guān)鍵通路，促使免疫微環(huán)境由"冷"轉(zhuǎn)"熱"。生存研究證實(shí)該策略能顯著延長(zhǎng)荷瘤小鼠生存期并降低腫瘤負(fù)荷，其療效依賴于活性CAR-T細(xì)胞的功能協(xié)同，為溶瘤病毒與細(xì)胞免疫聯(lián)合治療實(shí)體瘤提供了創(chuàng)新性解決方案。
上述前沿基礎(chǔ)研究成功將溶瘤病毒聯(lián)合療法推向新的高度，而其從實(shí)驗(yàn)室概念到臨床轉(zhuǎn)化，離不開成熟的工藝平臺(tái)與系統(tǒng)的臨床前研發(fā)支持。迪福潤(rùn)絲生物正是依托其全球領(lǐng)先的重組病毒載體技術(shù)平臺(tái)，為此類創(chuàng)新療法的開發(fā)提供全流程CRO解決方案。
迪福潤(rùn)絲生物溶瘤病毒候選株構(gòu)建服務(wù)
迪福潤(rùn)絲生物在溶瘤病毒藥物的臨床前研究方面具備系統(tǒng)化平臺(tái)能力。公司通過對(duì)病毒株基因組進(jìn)行改造，以提升溶瘤病毒的抗腫瘤活性。目前，公司可改造的溶瘤病毒載體涵蓋新城疫病毒（NDV）、水皰性口炎病毒（VSV）、單純皰疹病毒（HSV-1）等，已建立起多種類型的小鼠腫瘤模型，可為不同腫瘤提供系統(tǒng)性的溶瘤病毒有效性評(píng)價(jià)服務(wù)。
服務(wù)內(nèi)容：
服務(wù)案例：
圖5. 以NDV為載體的改造溶瘤病毒候選株（NDV-OV1,NDV-OV2,NDV-OV3）給藥后，成瘤小鼠腫瘤體積變化。A:LLC成瘤小鼠；B:B16F10成瘤小鼠。
圖6. 以VSV為載體的改造溶瘤病毒候選株(VSV-OV1)給藥后，成瘤小鼠腫瘤體積變化。A:LLC成瘤小鼠；B:B16F10成瘤小鼠。
DIFF溶瘤病毒平臺(tái)核心優(yōu)勢(shì)：
基于迪福潤(rùn)絲反向遺傳操作技術(shù)平臺(tái)（Viraltech Architect），可對(duì)絕大部分病毒進(jìn)行基因工程改造。平臺(tái)通過模塊化的DCVL（Design-Construct-Verify-Learn）的方式，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)積累與更新迭代。
DIFF NDV載體優(yōu)勢(shì)：
DIFF VSV載體優(yōu)勢(shì)：
迪福潤(rùn)絲生物依托全球領(lǐng)先的重組病毒載體技術(shù)平臺(tái)，為溶瘤病毒療法提供全流程CRO專業(yè)支持：從溶瘤病毒候選株構(gòu)建（如新城疫病毒NDV、水皰性口炎病毒VSV載體等）、到動(dòng)物模型藥效評(píng)價(jià)以及活體成像分析。公司擁有杭州唯一一家專注于P2病毒類動(dòng)物模型評(píng)價(jià)的企業(yè)實(shí)驗(yàn)室，加速創(chuàng)新療法從實(shí)驗(yàn)室向臨床轉(zhuǎn)化，助力企業(yè)IND申報(bào)成功！
參考文獻(xiàn)：
Liu M, Li C, Feng L T, et al. hCCL19-expressing recombinant Newcastle disease virus boosts CAR T cell infiltration and efficacy in solid tumor. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 2025;13:e011783