隨著干細胞治療和基于類器官的藥物開發技術的進步，作為干細胞培養和類器官、3D細胞培養的營養和支持載體，基質凝膠發揮著至關重要的作用?；|凝膠的其他應用還包括血管生成、體內腫瘤形成實驗等?；|凝膠是一種從EHS小鼠肉瘤中提取的可溶性基底膜制劑，富含細胞外基質蛋白。其主要成分包括層粘連蛋白、IV型膠原、內皮凝膠蛋白等，以及各種生長因子，如TGF-β、EGF、IGF、FGF等。在室溫下，基質凝膠會聚合形成具有生物活性的三維基質，模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，有助于體外培養和細胞分化。
由Arcegen生物技術公司開發和制造的Arcegel是一種基質凝膠，它不含有LDEV（乳酸脫氫酶升高病毒），內毒素含量極低，并且經過了徹底的檢測以確保沒有支原體污染。Arcegel包括各種類型，如基礎濃度型、高濃度型和低生長因子型。
應用指南
產品特點：
高安全性：無LDEV（乳酸脫氫酶升高病毒）
濃度多樣性：濃度范圍在8~20 mg/ml之間
良好的批間穩定性：嚴格的生產質量控制流程確保不同批次之間的性能穩定
內毒素含量低：內毒素含量≤4 EU/ml
污染物檢測：檢測結果顯示無支原體、細菌和真菌殘留
高產量：每批產量超過升級別
良好的兼容性：與任何類型的細胞培養基兼容
應用驗證
遷移和侵襲實驗
將稀釋后的Arcegel基質凝膠添加到Transwell的上層室中，然后在其上播種細胞，接著在37°C含5% CO2的條件下孵化24小時。用4%的甲醛固定后，用0.1%的結晶紫染料染色，然后在倒置相差顯微鏡下觀察和計數細胞。
圖1. 細胞侵襲后結晶紫染色的結果
3D細胞培養
將Arcegel基質凝膠與預先調整好濃度的單個肝細胞癌Hepg2懸浮液以1:1的比例輕輕混合。使用預冷的移液槍頭，將50μl上述混合的單細胞懸浮液加入到預冷的24孔板中，形成圓頂形狀的細胞滴。然后將板放置在37°C、5% CO2的細胞培養箱中，每天進行觀察并拍照記錄。
圖2. 3D細胞培養結果
表1：3D細胞培養基質凝膠使用參考指南
| 培養皿類型 |
細胞培養面積 (cm2) |
推薦體積 |
|
6-well plate |
9.6 |
200 μL/cm2 |
|
12-well plate |
4.5 |
180 μL/cm2 |
|
24-well plate |
2 |
180 μL/cm2 |
|
96-well plate |
0.32 |
160 μL/cm2 |
|
35mm culture dish |
11.78 |
200 μL/cm2 |
|
100mm culture dish |
58.95 |
200 μL/cm2 |
注意：不同批次的基質凝膠可能會存在一些濃度變化；推薦使用量僅供參考。
常見問題解答
01. 為什么在基質中觀察到顏色變化（從淺黃色變為深紅色）？
對于含有酚紅的基質凝膠，顏色變化的主要原因是酚紅與碳酸氫鹽和二氧化碳（CO2）之間的反應。然而，一旦與5% CO2平衡，顏色差異將會減少。解凍后，輕輕搖晃試劑瓶將確?；|凝膠均勻分散。
02. 處理基質凝膠時應注意什么？
所有操作必須在無菌條件下進行，并且應使用預冷的移液槍以確?；|凝膠處于均勻狀態。
03. 基質凝膠應如何分裝、冷凍和使用？
解凍后，可以使用預冷的冷凍管將Arcegel Matrix LDEV-Free基質凝膠分裝到多個管中。所有分裝都應使用預冷的冷凍管，快速冷凍并儲存，以避免反復凍融。所有參與程序的物品都應預冷，包括用于處理基質凝膠的預冷移液槍、槍頭和管。