AAV感染肺部有多種方法，較為常用的方法為鼻內滴注、氣管插管、氣管內注射等。之前已給大家介紹過鼻內滴注法，想查看的同學請點擊“鼻內滴注法 ”，本文再給大家介紹第二種肺部注射方法 — 內鏡輔助口腔氣管插管術，氣管內注射后續更新推出。

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一、內鏡輔助口腔氣管插管術簡介

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口腔氣管插管術 能夠將病毒載體直接灌輸入肺中，卻沒有外科手術的風險，并且避免了上呼吸道的病毒顆粒的損失。由于幾乎所有AAV病毒顆粒都會到達肺內，所以要嚴格控制AAV的使用量。同時，與鼻內滴注法相比，口腔氣管插管術需要一些特殊設備，操作起來也稍有難度。

內鏡輔助口腔氣管插管術

優點

病毒載體直接入肺，避免外殼手術風險；避免病毒顆粒的損失；

缺點

需嚴格控制AAV顆粒的用量；需一些特殊設備；操作較困難

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二、內鏡輔助口腔氣管插管術操作步驟

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1、腹腔注射氯\胺\ 酮和甲苯噻嗪將小鼠麻醉；

注意：動物必須處于足夠深的麻醉狀態以防止運動或對載體的反應而打噴嚏或**

2、將小鼠以背臥姿勢固定在嚙齒動物工作臺上；

A. 將門牙環置于小鼠上門牙上，并將尼龍搭扣連接到嚙齒動物工作臺下表面的相應尼龍搭扣上；

B. 小鼠的背部應完全平放在工作臺上，胸部不應偏向兩側，并用尼龍扣完全固定；

3、用尖頭棉棒把小鼠的舌頭卷起；

4、輕輕地把附有耳鏡的插管鏡插入喉嚨深部的氣管開口處（大約在耳朵前部），插管鏡的凹面應遠離舌頭；

5、輕輕移動耳鏡直到可以看到喉部（有時需稍微旋轉鏡子，以獲得佳視野）；操作時需注意動作幅度要小，如果只能看到舌頭背面，則需重新移出從頭開始操作；

6、當可以看清喉部時，便可加入一滴2%的利多卡因，在插管前，插管鏡可移出（小于30s），在此期間要定位導管針；

7、30秒以后，重復上述3-5的步驟，重新插入插管鏡，重新找到可以看清喉部的位置；

8、重新可以看清喉部后，導管針首先進入氣管開口，針到位后，插管鏡可以移出，然后引導導管緩緩向下，直到導管的中心（粉色部分）接觸到小鼠門牙，每只小鼠不要嘗試2次以上插入導管；

9、一旦導管到位，要把針移出以便小鼠正常呼吸；

10、確定導管在氣管內的正確位置；

11、用0.35mL的注射器通過導管按照3μL/g體重輸入AAV；

12、立刻使用1mL無針頭注射器輸入0.2mL空氣，并重復2-3次以減少AAV在導管內的殘留；

13、把導管移出；

14、將小鼠輕輕從工作臺拿下，并將頭部和胸部用折疊的紙巾小幅度墊高，以保證小鼠順暢的呼吸；

15、對小鼠狀態進行監測直到其蘇醒，預計在24到36小時之內會恢復輕到中度的呼吸。

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