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神奇的轉座子

作者:山東維真生物科技有限公司 2021-08-03T08:54 (訪問量:13173)

轉座又稱移位,是由可移位因子介導的遺傳物質重排現象。

轉座子(transposon,Tn)是存在于染色體DNA上可自主復制和位移的基本單位,研究表明轉座子存在于所有的生物體內,人類基因組中有35%以上的序列為轉座子序列,其中大部分與疾病相關。

轉座子分為兩大類∶插入序列(insertional sequence,IS)和復合型轉座子。

插入序列

插入序列是最簡單的轉座子,它不含有任何宿主基因。它們是細菌染色體或質粒DNA的正常組成部分。IS是可以獨立存在的單元,帶有介導自身移動的蛋白,也可作為其他轉座子的組成部分。

常見的IS序列較短(約1000bp),末端具有反向重復序列,轉座時往往復制宿主靶位點一小段(4~15bp)DNA,形成位于IS兩端的正向重復序列(圖1)。

圖1.插入序列

復合型轉座子

復合型轉座子是一類帶有某些抗藥性基因(或其他宿主基因)的轉座子,其兩側通常是兩個相同或高度同源的IS(圖2),這說明IS插入到某個功能基因兩端時就可能產生復合型轉座子。一旦形成復合型轉座子,IS的功能即被修飾無法再單獨移動,只能作為復合體移動。大部分情況下,這些轉座子的轉座能力由 IS決定和調節。

圖2.復合型轉座子

根據轉座機制的不同,可將轉座子分為逆轉錄轉座子DNA轉座子。逆轉錄轉座子以RNA為媒介進行轉座,采用“復制-粘貼”機制,即先將自身DNA轉錄形成RNA中間產物, 再逆轉錄產生新的DNA拷貝, 最后插入基因組的其他位置實現轉座, 而原位點的轉座子保持不變。DNA轉座子則以DNA為媒介進行轉座,采用“剪切-粘貼”轉座機制,在轉座酶的作用下, 轉座子從原位置切除下來并整合到新的位點。DNA轉座子相對逆轉錄轉座子而言,轉座效率高,易被人為改造,因而應用較為廣泛,其具體轉座機制如圖3。

圖3.DNA轉座子轉座機制

野生型的DNA轉座子中通常含有轉座酶編碼序列 , 轉座酶通過識別轉座子兩端的ITR(反向末端重復序列), 介導轉座子發生轉移。經人工改造后,中間的轉座酶編碼序列可被其它外源DNA序列所替換, 在細胞中轉座酶存在的情況下發生轉座, 從而將外源DNA插入基因組中, 實現轉基因操作(圖4)。

圖4. DNA轉座子實現轉基因操作的機制示意圖A:野生型DNA轉座子B:人工修飾的轉座子載體C:轉座酶表達載體

目前,已在真核生物中發現數十種DNA轉座子,具體分類和特征如下:

轉座子可以在基因組任意位置插入和切除,常用于哺乳動物細胞基因編輯研究中。目前發現的可用于哺乳動物基因轉移的DNA轉座子系統主要有以下3類:

1、類hAT轉座子——Tol 2,未經改造在天然狀態下即可作用于脊椎動物的轉座子,從日本青鳉魚的基因組中分離出來;

2、兩個類Tc1轉座子——Sleeping Beauty ( SB) 和 Frog Prince ( FP),分別從鮭魚和青蛙基因組中分離重建;

3、Piggy Bac超家族成員——Piggy Bac(PB),從甘藍蠖度尺蛾基因組中分離出來,目前研究者已將其應用領域拓展至魚類、寄生蟲和哺乳動物等轉基因研究中。研究表明,PB轉座系統在小鼠等胚系細胞具有較強的轉座活性。

?轉座子的遺傳學效應

① 引起插入突變 各種 IS、Tn 轉座子都可以引起插人突變。

② 產生新基因 如果轉座子上帶有抗藥性基因,它一方面造成靶DNA 序列上的插入突變,同時也使這個位點產生抗藥性。

③ 產生染色體畸變 當復制型轉座發生在宿主DNA原有位點附近時,往往導致轉座子兩個拷貝之間的同源重組,引起DNA缺失或倒位。

④ 引起生物進化 由于轉座作用,使原來在染色體上相距甚遠的基因組合到一起,構建成一個操縱子或表達單元,可能產生有新的生物學功能的基因和新的蛋白質分子。

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