研究背景
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研究表明，雄激素受體AR不僅能在前列腺癌中發揮重要作用，更能促進乳腺癌的發生發展。通過前期研究作者發現，USP14可以通過其去泛素化酶的活性穩定雄激素受體，促進前列腺癌的生長。本篇文章則主要探究去泛素化酶USP14對雄激素受體陽性乳腺癌發生發展的影響。目前該論文已經發表在《Oncogene》上（IF:6.854）。（本篇文章所用慢病毒產品由維真生物提供）
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路線設計
研究者通過siRNA和shRNA等工具，敲低USP14的表達，然后檢測雄激素受體AR的表達，泛素化水平和降解速率，判定USP14是雄激素受體AR的去泛素化酶。穩定AR的水平，并進一步通過AR的補救實驗判定USP14敲低或者抑制引起的乳腺癌細胞的生長抑制是依賴于AR的水平。
病毒產品及使用
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圖1、USP14干擾慢病毒感染六種乳腺癌細胞
研究者通過USP14干擾慢病毒感染多種乳腺癌細胞（MDA-MB453、MDA-MB 231、MCF7、MDA-MB 468、HCC1937、T47D），48h后，利用嘌呤霉素進行篩選，構建穩定表達的USP14 shRNA的乳腺癌細胞株。研究者通過檢測GFP的表達來檢測干擾慢病毒的感染與篩選效率，通過檢測USP14的表達，檢測病毒的感染效率。結果如圖1所示，USP14干擾慢病毒有著極高的感染效率與基因敲除效率。并且，USP14能調控AR的表達，抑制USP14基因的表達后，雄激素受體AR的表達顯著降低。
圖2、co-IP實驗驗證USP14是AR的泛素化酶
為證明USP14是AR的泛素化酶，研究者通過利用co-IP的實驗技術，檢測乳腺癌細胞MDA-MB-453中USP14、AR及兩種泛素酶的表達。結果如圖2所示，研究者發現在敲除USP14基因后，AR泛素化酶的水平顯著增加，這說明，USP14的確是AR的去泛素化酶，通過去泛素化途徑調節細胞內AR的水平；
圖三、Western Blot與免疫熒光技術探究USP14對AR的調節作用
接著研究者又通過Western Blot與免疫熒光技術，探究USP14對于AR轉移的影響。結果如圖三所示，在雄激素條件下，與對照組相比，干擾USP14的表達后，核內外的AR表達均下調（橙色為核外，藍色為核內），這說明，USP14確是調控了AR的表達而非AR的轉移。