當細胞中需要表達一個以上的基因時，可以使用雙反子或多順反子表達載體。在構建雙順反子或多順反子載體的各種策略中，來源于腦心肌炎病毒EMCV的內部核糖體進入位點(internal ribosome entry site，IRES)或來源于口蹄疫病毒FMCV的自剪切多肽2A(self-cleaving 2A peptide，2A)被廣泛應用，實現了在單個載體上同時表達多個基因的目的。
01 內部核糖體進入位點IRES IRES能夠在一些反式作用因子的輔助下，招募核糖體小亞基到mRNA的翻譯起始位點，使蛋白質翻譯起始不依賴于5′帽結構，從而使核糖體直接從mRNA中間起始翻譯成為可能，即允許在同一啟動子的控制下共同表達多個基因。 02 自剪切多肽2A 自剪切多肽2A于1991年在口蹄疫病毒（FMDV）中被發現，平均長度為18-22個氨基酸，位于小核糖核酸病毒家族成員的兩種蛋白質之間。2A肽的切割位點一般位于其C末端的甘氨酸（G）和脯氨酸（P）之間。自切割后，2A肽N末端的氨基酸殘基連接到上游蛋白，脯氨酸殘基則依然連接在下游蛋白，通常2A肽殘基可以通過弗林蛋白酶和信號肽去除。 2A肽的自裂解機制 （Wang Y et al. Sci Rep, 2015） 目前，主要有4種常用的2A肽，分別來源于口蹄疫病毒2A(F2A)、1型豬捷申病毒2A (P2A)、明脈扁刺蛾病毒2A (T2A)、馬甲型鼻炎病毒2A (E2A)，對應的序列如下： IRES和P2A的選擇
F2A:VKQTLNFDLLKLAGCVESNPG
P2A:GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP
T2A:EGRGSLLTCGDVEENPG
E2A:QCTNYALLKLAGDVESNPG
