自20世紀80年代凱利·穆利斯發明第一代PCR技術以來，“變性、退火、延伸”這三個簡單的步驟，歷經三十多年的蓬勃發展，如今，PCR技術已成為分子生物學領域不可或缺的基礎研究工具，廣泛應用于基因擴增、基因檢測、基因編輯等多個領域。本文將為您詳細介紹一代PCR的常見類型及其應用，助力您的科學研究。

常規PCR

常規PCR一般是由Taq DNA聚合酶介導的PCR反應，操作較為簡便，產物帶有A尾。通過瓊脂糖凝膠電泳對終產物進行定性和半定量分析。兼容樣本范圍廣，但保真性低，主要應用于常規重組質粒驗證和基因型鑒定等方面。

常規PCR產品

產品名稱：2×PCR Master Mix (With Dye) 2×常規PCR預混液（含染料）（N132002）

產品特點：

1）基礎PCR，分子實驗必備。

2）適用于菌液PCR和基因鑒定。

3）擴增出來的產物均是3端帶A的，同時均具有5’-3’外切酶活性。

高保真PCR

高保真PCR一般是由保真性較高的DNA聚合酶介導的PCR反應。第一代高保真DNA聚合酶是從棲熱原始菌Pyrococcus furiosus中獲得的具有校正功能的pfu酶，與常規Taq酶相比多了一種3’-5’的核酸外切酶活性（Proofreading活性），保真性大大提高且擴增的產物通常為平末端。目前主要有2類產品：一類是混合型的高保真酶，將帶有Proofreading活性的酶與普通Taq酶混合用于提高擴增效率；另一類是單一型的高保真酶，保真性更高。

高保真PCR產品

產品名稱：2× High-Fidelity PCR Master Mix (With Dye) 2×一代高保真PCR預混液（含染料）（N132014）

產品特點：

1）高保真PCR，83倍Taq。

2）超高特異性。

3）高性價比。

圖1. 對不同GC模板均能有效擴增

熱啟動PCR

熱啟動PCR，也稱Hotstart PCR。指通過一定條件將DNA聚合酶與其他PCR反應物隔絕，使其低溫條件下無活性，高溫加熱后釋放酶活，進而避免出現非特異性產物的PCR反應。熱啟動PCR的關鍵是熱啟動型的DNA聚合酶，一般通過抗體、配體或化學修飾等來封閉酶活性中心，不同的熱啟動修飾方法原理上有所區別，各有優劣勢（見下表）。通常應用于復雜模板、低拷貝基因擴增，也是IVD試劑的核心原料。

熱啟動PCR產品

產品名稱：2×HotStart Fast PCR Master Mix (With Dye) 2×熱啟動快速PCR預混液（含染料）（N132001）

產品特點：

1）快至1sec/kb。

2）兼容70%GC、長10kb片段。

3）十余物種數百個片段驗證高特異、高檢出，菌P亦適用。

圖2. 對不同物種檢測結果

直擴PCR

直擴PCR技術，是以未經基因組純化的微量原始樣本或其裂解產物作為模板進行PCR反應。廣泛適用于血液樣本、植物和動物等組織，與常規PCR相比，樣本用量少、操作簡單、實驗成本低、可高通量化操作。可應用于基因分型、轉基因鑒定等實驗。

Arcegen直擴PCR系列產品運用獨特的裂解體系，快速裂解樣品，裂解液可直接作為模板，搭配試劑盒中的具有超強抑制物耐受性的Taq DNA聚合酶進行基因的高效擴增。

圖3.組織直擴系列流程圖

小鼠直擴PCR產品

產品名稱：Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) 小鼠組織直接PCR試劑盒（N132021）

產品特點：

1）樣本需要量少：5mg鼠組織或1-5mm鼠尾。

2）模板制備更方便：無需研磨，無需精提純化gDNA。

3）優化的PCR體系：具有更高的特異性、更強的 PCR 反應抑制物耐受性。

圖4.適合不同類型的小鼠粗提組織
 

多重PCR

多重PCR，也稱復合PCR。反應原理、反應過程與常規PCR無異，需要在同一個PCR反應體系中，使用多對引物對多個基因同時進行擴增。理論上只要PCR擴增的條件合適，引物對的數量可以不限，但實際由于各種條件的限制，實際能夠擴增的產物有限。多重PCR反應體系的組成和PCR循環的條件需經過優化以確保同時擴增多個片段。具有高效性、系統性、經濟簡便性，難點是反應體系各組分的平衡。主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定某些病原微生物、某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。

圖5.多重PCR原理圖

多重PCR產品

產品名稱：Multiplex qPCR Probe Master Mix 通用多重qPCR探針法預混液（N132041）

產品特點：

1）兼容5重，靈敏度高達500copies/mL。

2）可耐受0.5%體積全血。

3）支持快速程序，1h內完成結果檢測。

4）24個月實時穩定檢測合格，反復凍融性能穩定。

圖6.相對于競品，更高的檢出率

巢式PCR

巢式PCR是指利用兩對引物進行兩輪PCR擴增的反應。首先使用目的片段外圍的引物對模板進行擴增，然后使用內部的巢式引物同時將第一輪PCR擴增產物作為第二輪擴增的模板。第二次PCR擴增得到的目的片斷短于第一次擴增。翌圣GMyc-PCR 支原體檢測試劑盒基于支原體16S-23S rRNA序列保守區域利用巢式PCR法原理可精確檢測到常見的支原體污染。主要應用于病毒檢測、測序分析、低表達基因檢測等。

降落PCR

降落PCR，又稱Touch-down PCR。通過設置PCR程序中的退火溫度，一般開始時高于預設的Tm值，隨著反應的進行，退火溫度逐漸降低到Tm值，并最終低于該溫度進行PCR反應。通過反應程序中退火溫度的設置，極大程度上降低了引物與模板的非特異性結合。主要用于PCR反應程序的優化，提高產物特異性。

常見的PCR類型介紹就到這里了。當然，除了上述介紹的PCR形式，還有錨定PCR、原位PCR等不同的PCR類型，如感興趣可自行查閱。

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