基質膠是一種從EHS小鼠腫瘤中提取的可溶性基底膜制劑，含有豐富的細胞外基質蛋白。其主要成分包括層粘連蛋白、IV型膠原、肝素硫酸蛋白多糖（HSPGs）、nidogen，以及TGF-beta、EGF、IGF、FGF、組織型纖溶酶原激活劑等生長因子，這些生長因子是EHS腫瘤中天然存在的。

基質膠最早由J. Engelbreth-Holm和Richard Swarm在20世紀80年代中期在丹麥發現并詳細描述。主要的生產過程包括用生理鹽水提取/洗滌腫瘤勻漿以獲得可溶性蛋白，然后從產品中提取不溶性復合物的溶劑，以及在低溫下用緩沖溶液進行透析以獲得無色至淡黃色的溶液。
 

表：基質膠的組成[1]

基質凝膠為組織和細胞提供了支持、拉伸強度和支架支持。它還作為細胞粘附和移動的三維亞結構，以及生長因子、趨化因子和細胞因子的儲存庫。此外，它還可以作為細胞形態變化和分化的信號。

由Arcegen Biotechnology開發和生產的Arcegel基質凝膠不含LDEV（乳酸脫氫酶升高病毒），內毒素含量極低。它經過了徹底的支原體檢測，以確保無支原體污染，包括不同類型如基礎濃度、高濃度、低生長因子等的基質凝膠。
 

應用指南

產品特點

高安全性：無LDEV（乳酸脫氫酶升高病毒）

多種濃度：濃度范圍在8~20毫克/毫升之間

良好的批間穩定性：嚴格的生產質量檢驗流程確保不同批次之間的性能穩定

低內毒素：內毒素含量 ≤ 4 EU/毫升

污染物檢測：經檢測無支原體、細菌和真菌殘留

高單批產量：單批產量超過升級別

良好的兼容性：與任何類型的細胞培養基兼容
 

遷移和侵襲實驗

圖：遷移和侵襲實驗的過程

1. 基質膠涂層

首先，將收到的Arcegel基質膠解凍，并用無血清培養基稀釋至1:8的比例（最終濃度不應超過3 mg/ml），用于涂層Transwell小室插入件的上室膜。將其放置在37°C下30分鐘，以使Arcegel基質膠聚合成凝膠狀。在使用前需保持膜的濕潤。

2. 細胞懸浮液的制備

1. 將細胞饑餓處理12-24小時以去除血清的影響（可選步驟）。

2. 消化細胞，消化后進行離心，棄去培養基，并用PBS洗滌1-2次。在含有BSA的無血清培養基中重懸細胞，調整細胞密度至4×10^4至2×10^5細胞/毫升。

3. 細胞接種
1. 向Transwell小室插入件中加入100μl的細胞懸浮液。

2. 向24孔板的下室中加入600μl含有20% FBS的培養基。注意避免下室培養基與插入件之間形成氣泡，因為氣泡可能會削弱甚至完全抵消下室培養基的趨化效應。

3. 培養細胞：進行標準培養12-48小時（時間主要取決于癌細胞的侵襲能力）。

4. 結果收集
1. 取出Transwell小室插入件，棄去孔中的培養基，用無鈣PBS洗兩次，用4%多聚甲醛固定30分鐘，然后適當晾干插入件。

2. 使用0.1%結晶紫染色20分鐘，輕輕擦去上表面未遷移的細胞，用PBS沖洗三次，然后在顯微鏡下400倍放大觀察并計數五個隨機視野中的細胞。
  

圖：細胞侵襲后結晶紫染色的結果。

常見問題解答

Q1: 收到的基質凝膠顏色變化（從淡黃色變為深紅色）的原因是什么？
A: 對于含有酚紅的基質凝膠，顏色變化的主要原因是酚紅與碳酸氫鹽和二氧化碳之間的相互作用。然而，在與5%二氧化碳平衡后，顏色差異會減小。解凍后，輕輕搖晃試劑瓶，以確?；|凝膠均勻分散。

Q2: 處理基質凝膠時應采取哪些預防措施？
A: 所有操作都應在無菌條件下進行，并使用預冷的移液槍頭以確保基質凝膠處于均勻的糊狀狀態。

Q3: 如何分裝、冷凍和使用基質凝膠？
A: 解凍后，Arcegel基質凝膠可以分裝到多個預冷的小管中。所有分裝都應使用預冷的冷凍管，并快速冷凍儲存，以避免多次凍融。使用過程中涉及的所有物品都應預冷，包括處理基質凝膠時使用的預冷移液槍頭、槍頭和管子。
 

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