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膠質母細胞瘤（GBM）因其高度惡性與治療困難，被視為實體瘤治療中的主要難題之一，其對各類免疫療法普遍表現出顯著抵抗。以往基于HSV的溶瘤病毒療法在GBM中效果有限，關鍵原因在于：其一，多數腫瘤細胞缺乏HSV的天然受體，導致病毒難以有效感染；其二，腫瘤微環境處于深度免疫抑制狀態，致使T細胞、NK細胞等免疫細胞功能受限，即使病毒能引起部分腫瘤細胞溶解，也難以激發有效的全身抗腫瘤免疫反應。
2025年12月，哈佛醫學院研究團隊在《Nature Cancer》（IF=28.5）發表了一項創新研究。該研究不再局限于直接殺傷腫瘤細胞的傳統思路，而是通過對HSV溶瘤病毒進行系統改造，將其設計為一種能夠特異性靶向腫瘤、激活免疫應答并改善腫瘤微環境的“多功能免疫調控平臺”，從而為GBM的免疫治療提供了新的策略方向。
針對膠質母細胞瘤難以被傳統溶瘤病毒感染的難題，研究團隊發現該腫瘤細胞普遍缺乏HSV-1病毒所需的天然受體，導致病毒無法有效進入。為此，他們選取了裂解能力較強的HSV-1 MacIntyre毒株，構建了一個便于基因編輯的病毒平臺。通過對病毒包膜蛋白進行改造，刪除了原有的受體結合區，并引入了能夠特異性識別腫瘤標志物（如EGFR和整合素）的靶向模塊，從而使病毒能更精準地結合膠質母細胞瘤細胞。實驗結果顯示，這種經過重定向設計的病毒在多種腫瘤細胞系中，尤其是LN229細胞中，展現出明顯提升的感染與復制能力。
在確保病毒特異性靶向腫瘤的基礎上，該研究進一步增強了其在瘤內的擴散能力與安全性。通過引入特定突變，有效提升了病毒在腫瘤細胞間的直接傳播效率，避免了傳統改造可能產生的缺陷顆粒，從而在實驗中實現了更優的橫向擴散效果。與此同時，研究構建了一套基于miRNA的調控開關：將一組在正常腦組織中高表達而在膠質瘤中低表達的miRNA識別序列，嵌入病毒關鍵基因中。這使得病毒在正常細胞內復制受到嚴密抑制，而在腫瘤細胞內則能順利增殖，構成了高效的特異性安全屏障。再輔以阻斷病毒沿神經遷移的基因改造，最終在動物模型中實現了病毒在瘤內有效擴增，同時對健康腦組織幾乎不產生毒性。
在實現靶向與安全的基礎上，該研究進一步將病毒改造為調控腫瘤免疫微環境的關鍵工具。通過使其表達包括IL-12、抗PD-1抗體在內的多種免疫調節因子，可協同解除T細胞、巨噬細胞等多重免疫抑制。動物實驗表明，這種多功能病毒能顯著延長模型動物的生存期，其中IL-12與抗PD-1的組合顯示出最優的協同療效，并能激發長期的免疫記憶，標志著其從傳統的裂解工具升級為可系統重塑免疫微環境的治療平臺。
該療法可重塑腫瘤免疫微環境，包括促進細胞毒性T細胞浸潤、激活巨噬細胞與NK細胞，并抑制免疫負向通路。這些變化共同逆轉了免疫抑制狀態，與顯著的腫瘤控制及生存改善直接相關。
研究人員構建的多功能工程化病毒，在多種模型中展現出持久的抗腫瘤效果。其核心機制在于對免疫微環境進行系統性調整：不僅能激活T細胞功能、增強NK細胞殺傷力，還將腫瘤相關巨噬細胞重編程為促炎表型，并通過清除抑制性介質維持整體的免疫活躍狀態，從而實現對腫瘤的長效控制。
這項工作的核心進展在于，將溶瘤病毒從傳統的腫瘤裂解劑，轉變為一個能夠協同調控多類免疫細胞的功能平臺。該設計不僅實現了對腫瘤的高效靶向與體內安全性，更通過在瘤內局部釋放多種免疫調節因子，系統性重塑腫瘤微環境，將其從免疫抑制狀態逆轉為免疫激活狀態。這為膠質母細胞瘤等難治性腫瘤提供了新的治療思路。此類可靈活組合功能模塊的病毒平臺，也為未來定制化免疫療法開辟了可能。
這項前沿研究清晰地展示了工程化溶瘤病毒平臺的巨大潛力，而將這樣的創新理念轉化為現實，則離不開強大的技術平臺與高效的研發支持。這正是「DIFF CRO」的價值所在。
「DIFF CRO」溶瘤病毒構建與藥效評價服務
DIFF CRO憑借其特色的重組病毒載體平臺，提供從病毒載體構建、改造、擴增純化到臨床前藥效學評價的一站式、高效率CRO服務。公司通過對病毒株基因組進行精準改造，以提升溶瘤病毒的抗腫瘤活性，并憑借優化的流程實現快速的方案輸出和顯著縮短研發周期。
服務內容：
溶瘤病毒載體類“閉環式”持續開發能力
「DIFF CRO」依托全球領先的反向遺傳操作技術平臺，建立了獨特的‘閉環式’持續開發能力。平臺采用模塊化的DCVL(設計-構建-驗證-學習)循環，不僅能持續迭代優化病毒載體，更確保了服務流程的高度標準化和高效性，從而為客戶帶來高性價比的研發體驗。
服務案例1：以VSV載體為例
水皰性口炎病毒（VSV）天然具有嗜神經性?！窪IFF CRO」通過替換VSV的G蛋白，有效去除其神經毒性，顯著提升安全性。同時，在基因組中插入特定細胞因子，使病毒在感染腫瘤細胞后能局部釋放免疫因子，強力激活抗腫瘤免疫，實現“溶瘤”與“免疫”雙重增效。
DIFF VSV載體優勢：
體外藥效驗證：展現廣譜殺傷潛力
圖1.VSV-OV在體外藥效實驗中對多種腫瘤細胞具有抑制活性
「DIFF CRO」研發團隊構建的VSV-OV在體外藥效試驗中對膠質瘤、結直腸癌、肝癌、肺癌等多種腫瘤細胞系均顯示出強大的直接殺傷活性。
體內藥效確證：在不同動物模型中獲得卓越腫瘤抑制效果
利用CT26小鼠移植瘤模型，VSV OV給藥治療后，大部分小鼠達到完全緩解（CR），8周后re-challenge實驗（在同一部位用同樣數量的腫瘤細胞系進行荷瘤），暫未觀察到CR小鼠再次長瘤（對照組小鼠荷瘤時年齡與VSV-OV給藥組小鼠相匹配，為20周齡）, 體現出持久免疫保護效果。
圖2.VSV-OV在CT26小鼠移植瘤模型中具有抑制活性以及持續的免疫保護效果
服務案例2：以NDV載體為例
除對VSV載體進行改造外，「DIFF CRO」也可對NDV，HSV-1等載體進行改造，以NDV載體為例構建溶瘤病毒株候體內藥效評價：
圖3. 以NDV為載體的改造溶瘤病毒候選株（NDV-OV1,NDV-OV2,NDV-OV3）給藥后，成瘤小鼠腫瘤生長相較于空白對照組被顯著抑制。A:LLC成瘤小鼠；B:B16F10成瘤小鼠。
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參考文獻：
Giovannoni, F., Strathdee, C.A., Faust Akl, C. et al. Retargeted oncolytic viruses engineered to remodel the tumor microenvironment for glioblastoma immunotherapy. Nat Cancer, 1994–2010 (2025).