各位科研打工人，你是不是也遇到過原代細胞轉染不進去的問題？要么轉染不進去，要么加大劑量后，轉是轉進去了，但細胞死了一大片。那么今天，我們就來聊聊實驗室里最讓人頭痛的話題——原代細胞轉染。

原代細胞，是指直接從生物體組織分離培養的細胞，它們保持著最接近體內狀態的特性，是許多研究的"黃金標準"。但正是這種"原生態"的特性，讓它們變得格外難伺候：

1.體質敏感：離開舒適的體內環境后，對外源核酸更為敏感，會啟動更強的防御機制降解外源DNA/RNA。

2. 環境適應性差：對轉染試劑和外來培養基等物質不夠適應，需要特定的培養基和培養條件，通用型轉染方案往往水土不服。

3. 增殖有限：增殖能力有限，轉染窗口期轉瞬即逝。

4. 耐受性差：對于一般細胞能夠耐受的轉染試劑毒性，原代細胞很可能耐受不了。

5. 實驗重復性差：即便同批次分離的細胞，轉染效率也可能天差地別，實驗結果重復性成謎。

那么，該如何化解這些難題呢？針對原代細胞的以上特點，我們可以嘗試如下解決方案：

一 試劑選擇有講究：

脂質體類試劑通常比陽離子聚合物更溫和，更有利于原代細胞的存活和核酸的進入；或者優先選用專為原代細胞設計的轉染試劑。

二 把控時機很關鍵：

在原代細胞對數生長期進行轉染，此時細胞生長力旺盛，耐受力較強；細胞密度要恰到好處(通常70-80%)，太少，不利于細胞存活，太多，不利于轉染成功；避免傳代次數過多（傳代次數過多會導致細胞狀態變差增殖減弱，更不利于轉染）。

三 優化方案不可少：

必須做劑量梯度預實驗，每種原代細胞對于核酸和轉染試劑的耐受度、接受度都不一樣，不做預實驗沒法確定最優轉染條件；質粒純度要保證，高純度質粒有利于高效轉染，生產質粒時可以考慮使用啟動子增強表達。

四 輔助手段來幫忙：

對于耐受性差的原代細胞，可在轉染后立即更換為新鮮培養基，以延長恢復時間；對于特別嬌貴的原代細胞，在轉染前可考慮使用特殊培養因子等，保證細胞狀態。

來自前線科研人的血淚建議

我們采訪了多位"轉染老手"，總結出這些肺腑之言：

 "不要迷信文獻條件，一定要自己優化！"

 "記錄每一批細胞的詳細信息，找出規律。"

 "準備Plan B，有些細胞就是轉不進去，換方法比死磕強！"

 "保持耐心，原代細胞轉染本來就是一場持久戰。"

當然，如果你希望更加高效、便捷地完成轉染，那也是有其他方法的。Arcegen Celthy SureXcel 3000轉染試劑——新一代高分子轉染試劑，從轉染每一步提高成功率！

高效轉染：在293T、HeLa、MCF7、HepG2、A549等三十多個細胞系中驗證，具有強大的轉染效率；

廣泛兼容：DNAmRNA/siRNA/miRNA/ASO全類型核酸通用；

毒性極低：新型高分子材料，毒性極低，最大限度提高細胞存活率。

對于原代細胞轉染極其適配！

原代巨噬細胞BMDM質粒轉染

使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在原代巨噬細胞BMDM中轉染質粒DNA，結果顯示，Celthy SureXcel 3000轉染效率優于競品T*3000。

原代豬肺泡巨噬細胞質粒轉染

使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在原代豬肺泡巨噬細胞轉染質粒DNA，結果顯示，Celthy SureXcel 3000轉染效率優于競品T*3000。

原代真皮成纖維細胞質粒轉染

使用Celthy SureXcel 3000和競品B*8000同時在原代真皮成纖維細胞轉染質粒DNA，結果顯示，Celthy SureXcel 3000轉染效率優于競品B*8000。

除了原代細胞，Arcegen SureXcel 3000在mRNA、siRNA轉染中也具有優秀的轉染效果。

mRNA高效轉染

使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在多種細胞中轉染mRNA，結果顯示，在不同細胞中，Celthy SureXcel 3000表現均優于競品T*3000。

siRNA高效轉染

使用Celthy SureXcel 3000和競品T*3000同時在多種細胞中轉染siRNA，結果顯示，在不同細胞中，Celthy SureXcel 3000表現均優于競品T*3000。

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