細(xì)胞培養(yǎng)的污染始終是困擾各位研究者的難題。嚴(yán)重的污染不僅讓數(shù)周的辛苦付諸東流，更可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)失真，影響結(jié)果。本文將系統(tǒng)梳理細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染類型，并提供具體、可操作的全方位對(duì)策，解決這個(gè)難題。
常見的細(xì)胞污染分為以下幾種類型：
01 細(xì)菌污染
識(shí)別特征：
培養(yǎng)液變化：短期內(nèi)（24-48小時(shí)內(nèi)）變得渾濁，靜置后可見底部有沉淀（細(xì)菌團(tuán)）。
pH值變化：培養(yǎng)液顏色迅速變黃（產(chǎn)酸），即便頻繁換液也無法維持。
顯微鏡下：在高倍鏡下可見大量細(xì)小的、顆粒狀的物質(zhì)在做“布朗運(yùn)動(dòng)”，細(xì)胞生長(zhǎng)停滯，形態(tài)變差，最終大量死亡。
圖 細(xì)胞細(xì)菌污染圖
對(duì)策：
將污染培養(yǎng)物高壓滅菌后丟棄，避免交叉污染。用75%乙醇徹底擦拭培養(yǎng)箱和超凈工作臺(tái)。
預(yù)防：
嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，穿戴實(shí)驗(yàn)服、手套、口罩；對(duì)所有入孵育箱的試劑進(jìn)行無菌測(cè)試；槍頭、培養(yǎng)瓶等耗材確保無菌，開封前用酒精或紫外消毒外包裝。
02 真菌污染
識(shí)別特征：
肉眼可見：培養(yǎng)液中出現(xiàn)白色或淺黃色的絮狀、球狀漂浮物。
顯微鏡下：霉菌菌絲呈細(xì)絲狀結(jié)構(gòu)，類似樹枝；酵母菌呈卵圓形或球形，常出芽生殖。
圖 細(xì)胞真菌污染圖
對(duì)策：
同細(xì)菌污染，立即丟棄并徹底清潔環(huán)境。
預(yù)防：
真菌孢子無處不在且難以殺滅，需加強(qiáng)超凈臺(tái)的紫外線照射時(shí)間（至少30分鐘），并保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的干燥與整潔。
03 支原體污染
識(shí)別特征：
培養(yǎng)液不渾濁，細(xì)胞病變不明顯，但細(xì)胞狀態(tài)變差：生長(zhǎng)緩慢、貼壁性下降、易凋亡。必須通過特定方法檢測(cè)，如DNA熒光染色或?qū)ｉT的支原體檢測(cè)試劑盒。
圖 細(xì)胞支原體污染圖
對(duì)策：
立即隔離疑似污染的細(xì)胞，并對(duì)所有細(xì)胞系進(jìn)行常規(guī)支原體檢測(cè)；使用專業(yè)的支原體清除試劑，按說明書治療一段時(shí)間后，再次檢測(cè)確認(rèn)是否轉(zhuǎn)陰。
預(yù)防：
對(duì)新引進(jìn)的細(xì)胞系進(jìn)行強(qiáng)制性的支原體檢疫；使用支原體預(yù)防劑；嚴(yán)禁共用培養(yǎng)基、胰酶等試劑，嚴(yán)禁用同一瓶試劑處理多株細(xì)胞。
04 黑膠蟲污染
識(shí)別特征：
培養(yǎng)液始終清亮、不渾濁、不變色；細(xì)胞間隙或表面出現(xiàn)“小黑點(diǎn)”“小碎片”，密度隨傳代遞增；黑點(diǎn)呈原地布朗運(yùn)動(dòng)，不定向游動(dòng)；營(yíng)養(yǎng)消耗快, 需頻繁換液；空泡化、拉絲、脫落；青霉素-鏈霉素、慶大、兩性霉素B均不能清除。
圖 細(xì)胞黑膠蟲污染圖
對(duì)策：
對(duì)于非珍貴細(xì)胞，最安全的方法是直接丟棄污染細(xì)胞，徹底消毒，從根本上杜絕擴(kuò)散；對(duì)于珍貴細(xì)胞，可聯(lián)用多種抗生素嘗試抑制，或者直接購買市面上的支原體清除試劑，挽救細(xì)胞。
預(yù)防：
規(guī)范無菌操作、使用質(zhì)量可靠的血清（可熱滅活）、定期清潔消毒培養(yǎng)箱和水浴鍋；務(wù)必定期凍存純凈的細(xì)胞種子，遭遇污染后及時(shí)復(fù)蘇；使用支原體預(yù)防試劑進(jìn)行預(yù)防。
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