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基因轉染動物細胞的方法有哪些?

作者:山東維真生物科技有限公司 2021-08-03T08:53 (訪問量:12491)

①磷酸鈣共沉淀法 用Ca2+沉淀磷酸離子和DNA,沉積在細胞質膜上的DNA可能通過吞噬作用被細胞吸收。

②DEAE-葡聚糖 它能結合DNA并促使細胞吸收。

③脂質體法 利用類脂經超聲波、機械攪拌等處理,形成雙脂層小囊泡,將DNA溶液包裹在內,通過與細胞質膜融合而使DNA進入細胞。

④脂質轉染法 用人工合成的陽離子類脂與DNA形成復合性,借助類脂穿過質膜而將DNA導入細胞內。

⑤電穿孔法 在脈沖高壓電場作用下將質膜瞬間擊穿,DNA得以進入細胞,細胞膜隨即修復正常。

⑥基因槍法 采用高速微彈發射裝置,常用直徑為1 μm左右的惰性重金屬粉末作為微彈,如鎢粉或金粉,其上沾有DNA,置于檔板的凹穴內。當用火藥或高壓氣體發射彈頭撞擊檔板時,微彈即以極高的速度射向靶目標。

在以上諸方法中,磷酸鈣共沉淀法成本低、操作方便,但效率低;脂質轉染法和電穿孔法,前者需要昂貴的試劑,后者需要特殊的儀器,但效率高,現在較常用。對哺乳動物受精卵等較大的細胞,導入外源DNA可以用顯微注射法,該方法效率極高,還可直接將DNA送入核內,但需要昂貴儀器,且技術復雜不易掌握。

除上述幾種方法外,還可采用病毒介導的轉染方法,更適用于較難轉染的細胞,目前常用的有腺病毒、慢病毒及腺相關病毒(AAV),可根據以下3種病毒的特性選擇合適的載體工具:

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