在細胞凋亡的早期階段，細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸（PS）轉移到外側，暴露在細胞外環境中。這導致細胞膜的通透性增加，使得PS能夠與Annexin-V探針特異性結合。目前，Arcegen提供了一種適用于早期凋亡檢測的Annexin-V細胞凋亡檢測試劑盒。Annexin-V是一種依賴于Ca2+的磷脂結合蛋白，對PS具有很強的親和力。此外，該檢測試劑盒還提供PI/7-AAD用于雙重染色。由于正常細胞不會被染色，早期凋亡細胞可以被Annexin-V標記，而壞死或晚期凋亡細胞則被PI/7-AAD染色，從而可以清晰地區分不同階段的細胞。
圖2. Annexin-V實驗的原理
性能亮點:
1. Annexin-V探針的多種熒光標記
Annexin-V可以被標記上不同的熒光團，包括PE、FITC、Alexa Fluor 488等，這些熒光團針對的是細胞膜上磷脂酰絲氨酸（PS）的外化。在不同的激發和發射通道下，它們會發出綠色或紅色的熒光信號，可以與核探針等其他標記結合使用，進行多色細胞染色。
圖3a. 使用Annexin-V-Fluor647（紅色）染色的細胞，來源：參考文獻
圖3b. 使用Annexin-V-FITC（綠色）染色的細胞，來源：參考文獻
2. 高靈敏度和特異性的Annexin-V探針
在納摩爾濃度水平下，Annexin-V能夠選擇性地識別并標記早期凋亡細胞中外部化的PS，不會標記其他DNA或RNA，從而能夠檢測到極少量的凋亡細胞。
3. 低背景干擾和強穩定性
沒有來自其他熒光顏色的背景干擾，使得染色清晰。此外，不同批次之間的性能保持穩定。
此外，在早期凋亡過程中，線粒體膜電位的降低會導致膜通透性的變化。JC-1染料可以檢測線粒體膜電位的變化。在正常的線粒體中，JC-1發出強烈的紅色熒光。然而，在凋亡的早期階段，由于膜電位的降低或喪失，JC-1產生綠色熒光。熒光的增強或減少可以反映線粒體內膜電子親和力的增加或減少。