細胞遷移與侵襲是細胞生物學中的關鍵過程，廣泛應用于腫瘤轉移、胚胎發育、免疫反應和傷口愈合等研究領域。今天，我們將深入探討Transwell實驗，一種經典的體外實驗方法，用于評估細胞的遷移和侵襲能力。

實驗簡介

Transwell實驗利用帶有微孔的聚碳酸酯膜將孔板分隔成上下兩部分，上室加入待測試細胞，下室加入含有趨化因子的培養基。實驗者可以通過染色或計數遷移至下腔的細胞，評估其遷移或侵襲能力。

（一）細胞遷移實驗

細胞遷移是指細胞在特定化學信號或其他刺激下，從一個位置移動到另一個位置的過程。Transwell遷移實驗通過在上下兩層培養基之間建立一個化學梯度，誘導細胞遷移。主要應用于腫瘤轉移研究、免疫反應研究（免疫細胞的趨化性）和傷口愈合研究。

（二）細胞侵襲實驗

細胞侵襲是指細胞通過細胞外基質（ECM）的能力，是腫瘤轉移過程中的關鍵步驟。在Transwell侵襲實驗中，通常會在小室的上室面鋪上一層基質膠，模擬細胞外基質環境。主要應用于腫瘤轉移研究和胚胎發育研究。

實驗步驟

（一）細胞遷移實驗

1.細胞準備：

提前一天更換為無血清培養基，將細胞饑餓12-24h，去除血清的影響。

使用0.25%胰酶溶液將細胞從培養皿中分離，離心后用無血清培養基重懸。

根據細胞類型調整細胞濃度，通常為5×10⁵個/mL（可根據具體情況進行適當調整）。

2.Transwell小室準備：

向Transwell上室加入100 µL細胞懸液，下室加入600 µL含有趨化因子（如10% FBS）的培養基。

3.培養與觀察：

將培養板放入37℃、5% CO₂的培養箱中，培養12-48小時（根據細胞種類調整）。

培養結束后，用棉簽輕輕擦去上室未遷移的細胞。

用4%多聚甲醛固定細胞，結晶紫染色后顯微鏡下觀察并計數。

（二）細胞侵襲實驗

1.細胞準備：同（一）中細胞準備步驟。

2.Transwell小室準備：

1)1:8稀釋基質膠：100 μL基質膠加入800μL無血清培養基，吹打混勻后，彈動EP管使液體集中在管底（稀釋后的基質膠濃度參考1mg/mL，不超過 3mg/mL；稀釋比例并不固定，也可以取中間值1:4）。

2)混勻后立即吸取50μL稀釋后的基質膠到Transwell小室上層，逐滴加入，蓋上蓋子震板3-5次，使得每個小室上層液面平齊。

3)置于37℃培養箱中2-4h充分凝固。

4)使用前需進行水化，加入200μL無血清培養基水化30min（潤透即可，時間可延長）。

5)向Transwell上室加入100 µL細胞懸液，下室加入600 µL含有趨化因子（如10% FBS）的培養基。

3.培養與觀察：

將培養板放入37℃、5% CO₂的培養箱中，培養12-48小時（根據細胞種類調整）。

培養結束后，用棉簽輕輕擦去上室未侵襲的細胞。

用4%多聚甲醛固定細胞，結晶紫染色后顯微鏡下觀察并計數。

注意事項

細胞狀態：確保細胞在實驗前處于良好的生長狀態，避免細胞損傷?？稍趯嶒炃皩毎M行活力檢測。

無菌操作：整個實驗過程需在無菌環境下進行，避免細胞支原體污染。必要時可對細胞進行支原體檢測。

基質膠處理：基質膠鋪平需均勻，避免氣泡產生。同時避免在小室和下層培養液之間產生氣泡，因為氣泡會減弱趨化作用。

培養條件：嚴格控制培養箱的溫度和CO₂濃度，確保細胞正常生長。

Transwell實驗因其操作簡便、結果可靠，已成為細胞遷移與侵襲研究中的重要工具。希望這篇文章能幫助你在實驗中取得更好的結果！如果有任何疑問或需要進一步的幫助，歡迎留言交流哦。

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