RSV藥物及疫苗藥效評價解決方案
呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）是一種包膜單股負鏈RNA病毒， RSV可以引起全年齡段人群的呼吸道感染，是世界范圍內引起5歲以下兒童急性下呼吸道感染（ALRTI）最常見的病毒病原，是造成嬰幼兒病毒性呼吸道感染住院的首要因素。目前對于RSV的防治手段主要是疫苗及抗體藥物,然而，疫苗方面國內目前尚未有一款產品獲得批準上市。藥物方面的研發熱點集中在抗體藥物的研發，如RSV融合抑制劑等。未來十年，中國RSV藥物整體市場（包括治療藥物及預防藥物）預計將增至2032年的57.95億人民幣，年復合增長率為70.7%。
圖1. RSV藥效評價一體化解決方案
為助力更多RSV藥物及疫苗的研發上市，迪福潤絲生物專注于提供高質量的臨床前研究支持，能夠為客戶提供從體外到體內的RSV藥效評價一體化解決方案（圖1）。在體外評價方面，我們運用熒光斑點計數法通過DIFF-GFP熒光報告病毒檢測標記病毒抗原的熒光抗體，可以識別早期感染和低水平的病毒復制，24小時即可得到結果（圖2），無需擔心病毒大量復制引起細胞病變或合胞體對試驗結果的影響，精準評估候選藥物的抗病毒活性；在體內評價方面，我們基于多種動物模型，結合病毒載量檢測、組織病理分析和炎癥因子監測等手段，全面驗證藥物或疫苗的有效性。通過一體化的研究流程，迪福潤絲生物能夠高效銜接各階段實驗，幫助客戶降低研發風險，加速產品推進，為抗RSV藥物和疫苗的開發提供有力支持。
圖2.熒光斑點計數法-RSV中和抗體檢測的實驗結果案例（左上角為熒光數值）
DIFF RSV毒株庫
迪福潤絲生物建立了完善的生物資源庫（Bio Database）,可提供豐富的RSV毒株進行更加準確可靠的疫苗評價。檢測用毒株包括RSV A和RSV B兩種亞型共9種毒株（圖7），其中包括標準株、臨床株（RSV-B 9393及2444）及重組病毒株等，有助于準確了解藥物及疫苗對自然感染的有效性。
圖7.迪福潤絲生物RSV毒株庫
RSV體內藥效評價小動物模型
在動物模型的選擇上，常用的包括小鼠、棉鼠、雪貂等。小鼠和棉鼠模型因其可操作性和對RSV的敏感性，廣泛用于初步藥效篩選（圖3）。迪福潤絲生物通過病毒接種的方式模擬小鼠、棉鼠的自然感染路徑。
圖3.RSV嚙齒動物感染模型效果對比（棉鼠、Balb/C小鼠）
RSV攻毒保護試驗案例
迪福潤絲生物建立了針對棉鼠、Balb/C小鼠的感染模型。在下面的案例中，我們采用RSV A型和B型兩種不同毒株對Balb/C小鼠進行攻毒，攻毒后收集收集小鼠的鼻、肺組織，通過qRT-PCR檢測組織病毒載量，對某候選藥物有效性進行評估（組圖4、5）。
RSV-A2株攻毒結果如下：
組圖4.RSV-A2株攻毒試驗結果（體重變化、肺指數、病毒拷貝數）
RSV-B9320株攻毒結果如下：
組圖5.RSV-B9320株攻毒試驗結果（體重變化、肺指數、病毒拷貝數）
RSV感染棉鼠并不會產生如體重、體溫等臨床體征的變化，但在肺部及棉鼠的下呼吸道有明顯擴增變化。肺組織病毒基因和活病毒數目都在感染后第4-5天達到峰值，基因拷貝數可達10^6-7，活病毒數目達10^5-6。感染后第6-7天病毒滴度迅速下降。第7天病毒從肺部清除。病毒在鼻子中的復制時間略有延長，到第9天清除。血清NA在感染后第6-9天升高（圖6）1。
圖6.RSV感染棉鼠模型后的感染情況
RSV體內藥效評價服務內容
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迪福潤絲生物RSV體內藥效評價服務 |
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實驗動物 |
棉鼠、Balb/C小鼠等 |
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感染方式 |
吸入麻醉后滴鼻感染或氣管攻毒 |
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檢測指標 |
• 鼻、肺組織病毒載量：定量PCR法、蝕斑法、TCID50法（抗病毒效果） • 血清結合/中和效價：特異性抗RSV IgG檢測、不同毒株的微量中和實驗（體液免疫效果） • 肺組織病理：肺組織HE染色，肺泡灌洗液流式檢測炎性（評估疫苗增強效應的重要指標：肺泡炎） • 免疫細胞激活情況：流式細胞術（細胞免疫） • 細胞因子分泌情況：ELISPOT（細胞免疫）
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成果交付 |
原始數據、檢測報告等 |
參考文獻
1. Xiang, Wen,Shi, Mo,Shenglin, Chen et al. Pathogenic difference of respiratory syncytial virus infection in cotton rats of different ages.[J] .Microb Pathog, 2019, 137: 0.
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